[发明专利]一种合成肽疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种用于O型口蹄疫合成肽疫苗的多肽，其中所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所示。 

2.一种用于O型口蹄疫合成肽疫苗的多肽，其中所述多肽是通过将如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列中全部缬氨酸用正缬氨酸替代、全部亮氨酸用正亮氨酸替代获得的。 

3.一种口蹄疫合成肽疫苗，其包括一种或多种选自权利要求1所述的多肽。 

4.一种口蹄疫合成肽疫苗，其包括根据权利要求2所述的多肽；或者包括氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的多肽的二聚体。 

5.根据权利要求3或4所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗包含佐剂。 

6.一种根据权利要求1或2所述的多肽的制备方法，其中包括以下步骤： 

（1）以氨基树脂为起始原料，以9-芴甲氧羰基保护的氨基酸为单体，按照所述氨基酸序列依次缩合接上氨基酸，每步缩合反应后用乙酰咪唑封闭未反应的氨基端； 

（2）合成完毕后加入裂解试剂裂解多肽； 

（3）使用乙醚收集、沉淀多肽； 

（4）超滤纯化多肽后进行无菌处理。 

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述裂解试剂的组分体积比为三氟乙酸：三异丙基硅烷：苯酚：H₂O=85：8：6：1。 

8.根据权利要求6或7所述的制备方法，其特征在于，所述裂解时间为1-4小时。 

9.根据权利要求6或7所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）包括以下步骤： 

（a）脱保护反应：将氨基树脂置于体积百分比为15-30%的六氢吡啶的N-甲基吡咯烷酮（NMP）溶液中，在20-28℃条件下反应25-40分钟脱除氨基树脂上的9-芴甲氧羰基保护基团； 

（b）洗涤：氮气吹干，N-甲基吡咯烷酮洗涤氨基树脂； 

（c）缩合反应：加入1-羟基苯并三唑（HOBT）、二环己基碳二亚胺（DCC）与9-芴甲氧羰基保护的氨基酸在20-28℃条件下反应0.5-2.5小时； 

（d）洗涤：氮气吹干，N-甲基吡咯烷酮洗涤氨基树脂； 

（e）封闭反应：加入重量体积百分比为1.5-4%的乙酰咪唑的N-甲基吡咯烷酮（NMP）溶液，在20-28℃条件下反应20-40分钟。 

10.根据权利要求6或7所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（4）包括以下步骤： 

（a）使用切向过滤膜包在20-28℃条件下超滤多肽抗原，除去小分子杂质； 

（b）使用0.2微米在线滤器除菌保存。 

11.一种根据权利要求3所述的疫苗的制备方法，其中包括以下步骤： 

（1）用注射用水将一种或多种选自权利要求1所述的多肽稀释到50μg/ml制得抗原水相； 

（2）将佐剂经121℃、30分钟灭菌备用； 

（3）在20-28℃条件下，按照抗原水相与佐剂1：1的体积比，先将佐剂加入乳化罐内，90-150转／分钟慢速搅拌1.5-3分钟，缓慢加入水相，加完后搅拌20-30分钟，再高速8000-10000转／分钟搅拌15-30分钟，静置5分钟，分装后即得。 

12.一种根据权利要求4或5所述的疫苗的制备方法，其中包括以下步骤： 

（1）用注射用水将根据权利要求2所述的多肽、或氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的多肽的二聚体稀释到50μg/ml制得抗原水相； 

（2）将佐剂经121℃、30分钟灭菌备用； 

（3）在20-28℃条件下，按照抗原水相与佐剂1：1的体积比，先将佐剂加入乳化罐内，90-150转／分钟慢速搅拌1.5-3分钟，缓慢加入水相，加完后搅拌20-30分钟，再高速8000-10000转／分钟搅拌15-30分钟，静置5分钟，分装后即得。 

13.根据权利要求1或2所述的多肽、或氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的多肽的二聚体、权利要求3至5中任一项所述的疫苗在制备预防O型口蹄疫的药物中的用途，其中所述O型口蹄疫为猪O型口蹄疫。