[发明专利]一种高抗癌活性的朴菇菌丝体

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗癌活性提高的菌丝体，具体涉及一种朴菇多糖组分比例特定的朴菇菌丝体。

背景技术

朴菇(Flammulina velutipes)属口蘑科、金钱菌属。近年来，其菌丝体所含朴菇多糖FVP(Flammulina velutipes Polysaccharide)的抗癌活性日益为人们所关注。肿瘤组织形态学和组织化学观察发现，FVP能抑制肿瘤生长、使肿瘤坏死程度增加、糖元减少、肿瘤组织酸性非特异性酯酶活力下降。

FVP是一系列朴菇多糖分子的统称，按所含碳链长短分为FVP-1(相对分子量1.48×10⁴)、FVP-2(相对分子量2.73×10⁴)、FVP-3(相对分子量5.4×10⁴)、FVP-4(相对分子量5.74×10⁵)和FVP-5(相对分子量1.93×10⁶)。其中FVP-1、FVP-2和FVP-3经现代药理学证明具有抗癌活性。天然的金针菇菌丝体中FVP-1、FVP-2和FVP-3的含量比值约为20∶15∶56。现代药理学研究认为，不同的朴菇多糖在机体内的药理活性存在差异。真菌培养技术表明：微量元素会影响菌丝体胞外多糖的产率，但对多糖的组分构成、活性等的影响未见报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种朴菇多糖FVP-1、FVP-2、FVP-3比例特定的高抗癌活性的朴菇菌丝体。

本发明的产品为：一种含朴菇多糖FVP-1、FVP-2、FVP-3的重量比为1～3∶3～5∶3～5的朴菇菌丝体，其中优选含朴菇多糖FVP-1、FVP-2、FVP-3的重量比为1∶2∶2的朴菇菌丝体。

本发明的产品是通过以下工艺制备得到的：

1、试管菌种

由中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心购买，菌种编号和名称如下：AS 5.474 Flammulina velutipes金针菇。

2、斜面菌种的培养

培养基配方：马铃薯200g/L(去皮、切成小块，煮沸半小时，过滤，取滤液)，葡萄糖2.0g/L，磷酸二氢钾(KH₂PO₄)1g/L，硫酸镁(MgSO₄)1g/L，酵母粉5g/L，琼脂20g/L，PH值自然。

培养方法：将试管菌种接种至斜面培养基上放入恒温培养箱内25±1℃培养，培养至斜面上长满粗壮、细密、洁白、有细粉状物的菌丝体。

3、一级摇瓶菌种培养

培养基配方为：黄豆饼粉15g/L，葡萄糖10g/L，蔗糖20g/L，磷酸二氢钾(KH₂PO₄)1g/L，硫酸镁(MgSO₄)0.5g/L，铁0.5mg/L，锌0.5mg/L，锰0.5mg/L，锗0.25mg/L，PH值自然。

培养方法：取斜面菌种约0.5cm²接种至于装有100ml种子培养基的500ml三角瓶中，置往复式摇床上振荡培养5-7天，转速120rpm，温度25±1℃。培养至培养液中出现大量菜籽大小的白色球菌。

4、二级摇瓶菌种培养

培养基配方与一级摇瓶相同

培养方法：将培养好的一级种子以10％的接种量接种至事先灭菌的摇瓶中，置往复式摇床上振荡培养3-5天，转速120rpm，温度25±1℃。培养至培养液中出现大量菜籽大小的白色球菌。

5、深层液体发酵灌培养

培养基配方与摇瓶相同。

工艺参数：在0.1Mpa下灭菌30分钟，冷却后案接种量5％-10％接种入待用菌种，温度25±1℃，罐压为0.03-0.04MPa，通气量为1：0.5V/V/min。

放灌标准：发酵时间70-80小时，平板无杂菌，菌丝球上浮二分之一，镜检有锁状联合，菌球不能自溶。

有益效果：

本发明所述的朴菇菌丝体，与现有技术发酵的普通菌丝体相比，抗癌活性显著增强。

相关实验数据：

(一)体外实验：

1、样品：上述方法发酵制得的朴菇菌丝体

对照：普通发酵方式制得的朴菇菌丝体

2、多糖提取