[发明专利]一种自身抗原表位、其编码基因及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及免疫化学、蛋白质组学和肿瘤免疫学领域。具体地涉及一种自身抗原表位、其编码基因及其用途。更具体地，涉及人组织蛋白酶D(cathepsin D)抗原表位区及其编码基因，以及这种多肽在鉴定胰腺癌患者血清中自身抗体中的用途。

背景技术

自身抗体是指抗自身细胞内、细胞表面和细胞外抗原的免疫球蛋白，自身抗体可以是生理性的，也可以是病理性的。生理性自身抗体普遍存在，主要用于清除衰老或死亡的细胞。当机体免疫功能失调，自身抗体的滴度超出一定阈值时，就成为病理性的了，例如，自身免疫疾病就是一种涉及自身抗体的慢性疾病。对于临床研究和诊断而言，结合病人的病史和体检，自身抗体阳性将有诊断自身免疫病的意义。(滕庆，自身免疫性疾病自身抗体检查方法及其评价，中国实用儿科杂志，2003，(02))。

最近几年研究人员发现血清中的自身抗体不是自身免疫病的唯一特征，自身抗体也可以出现在免疫系统发生异常改变的其他疾病，如肿瘤(Belousov，P.V.等人，(2008)Biochemistry(Mosc)73，562-72)中。目前已经在多种人类肿瘤中检测到自身抗体，包括肺癌、大肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌、卵巢癌、胰腺癌和副肿瘤性神经综合征等。

自身抗体识别的抗原物质即为自身抗原，自身抗原是自身抗体产生的前提，自身抗原可以是完全正常的组织成分，也可以是已改变了的细胞成分，比如肿瘤发生的早期阶段，肿瘤细胞内或者血液循环中就会出现自身抗原，尤其是在肿瘤发生的早期阶段，肿瘤细胞内或者血液循环中会产生肿瘤相关抗原，但是其难以被常规的方法检测到，但是机体针对这些自身抗原所产生的自身抗体作为免疫系统对肿瘤存在信号的生物放大而长期存留在肿瘤细胞内或者血液循环中(Purcell，A等人，(2004)Mol Cell Proteomics 3，193-208)，这种自身抗体可以识别那些难以直接检测到的仅发生了微弱变化的肿瘤相关抗原(Hanash，S.(2003)Nat Biotechnol 21，37-8)。

另外一些抗原，例如细胞周期蛋白，不但自身在肿瘤中高表达，并且可以诱导机体产生针对细胞周期蛋白的自身抗体，这些自身抗体对于肿瘤的诊断具有较好的灵敏度和特异度(Covini，G等人，(1997)Hepatology 25，75-80)。因此，基于体液免疫筛选和鉴定的自身抗体和肿瘤抗原，将有利于挖掘肿瘤早期筛查和诊断的潜在的生物标志物。

发明概述

如前所述，自身抗体作为免疫系统对肿瘤或者疾病存在信号的生物放大，相对而言，可以长期存在于肿瘤细胞内或者血液循环中，利用这种现象，研究人员可以通过检验自身抗体的存在来对肿瘤的发生、发展、患病的风险等进行评估和预测，由此可以对疾病相关蛋白进行研究，更进一步地，能够实现包括肿瘤在内的疾病的早期检测和预防。

但是目前对于如何捕获自身抗体尤其是体液中的自身抗体还没有很满意的工具，因为在体液中的一些自身抗体的含量往往非常低，而作为捕获自身抗体尤其是捕获肿瘤特异性的自身抗体的自身抗原来源有限。虽然目前本领域的技术人员通过CTL识别法、MHC结合的多肽洗脱法等获得了一些自身抗原，例如这些自身抗原都可以在网络数据库中查询(http://www2.licr.org/CancerImmunomeDB/)得到，但是随着高通量蛋白质组学技术的不断发展，这些抗原远远不能满足日益增长的高通量操作的需要。

而且完整抗原的制备通常需要克隆、过表达、分离以及纯化多个步骤。虽然最近已发展了高通量的生产和纯化目的蛋白的技术(ZhuH等人，Global analysis of protein activities using proteomechips.Science，2001，293(5537)：2101-5)，但是如何制备高质量并且有功能活性的完整的重组抗原依然是研究人员面临的主要挑战。另外，制备完整抗原的成本非常昂贵(Andresen H等人，Functional peptide microarrays for specific and sensitiveantibody diagnostics.Proteomics，2006，6(5)：1376-84)。