[发明专利]纤维素酶高产菌株的筛选方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种纤维素酶高产菌株的筛选方法。

背景技术

纤维素酶在医药、遗传、纺织、日用化工、造纸、环境、食品发酵、饲料、工业洗涤、石油开采、资源再生、废水处理、农业、生物能源等各个领域具有广泛的应用。纤维素酶的种类繁多，包括滤纸酶、内切葡萄糖酶、β-葡萄糖苷酶、外切葡聚糖酶等。

纤维素酶通常是由产纤维素酶的菌株的发酵制得的，因此，产纤维素酶菌株的品质对纤维素酶的生产和应用来说是非常重要的。

目前，用于筛选纤维素酶高产菌株的方法主要是将采集得到的大量菌株样品加入含有纤维素的富集培养基中进行培养，根据各菌株在含有刚果红的固体培养基上形成的透明圈的大小，对采集到的样品中存在的菌株进行初筛；将能够形成较大透明圈的菌株接种到产生纤维素酶的培养基中进行培养；之后对菌株在产酶培养基中产生的酶活力进行检测，根据酶活力的大小对初筛后的菌株进行复筛。这种方法对进行大量自然界样品的筛选来说不太现实，其工作量巨大且操作复杂，同时由于刚果红固体培养基的厚度不易控制以及有些菌株(例如真菌)会产生孢子向外四射，致使透明圈的大小不易分辨，从而导致筛选的效率很低。

因此，开发一种简单高效的筛选纤维素酶高产菌株的方法成为迫切需要解决的问题。

发明内容

本发明的目的在于现有的筛选纤维素酶高产菌株的方法存在的工作量巨大且筛选效率低的缺点，提供一种简单高效的用于筛选纤维素酶高产菌株的方法。

本发明提供了一种筛选纤维素酶高产菌株的方法，其中，该方法包括：将含有菌种的多个样品置于产纤维素酶的产酶培养基中培养3-7天，之后检测产生的酶的活性；选择产生的酶的活性较高的样品的富集培养物涂布在土豆汁固体培养基上培养直至产生菌落，挑取产生的菌落并分别置于产纤维素酶的产酶培养基中，培养3-7天后；检测各菌落产生的纤维素酶的活力，根据所得活力确定纤维素酶高产菌株。

本发明提供的方法可以处理大量的采集样品，初筛后可以快速地缩小目标范围，并且省去了筛选结果不准确的使用刚果红产生透明圈的初筛操作，在初筛后大大地减少了工作量，提高了复筛的针对性，是一种简单高效的筛选方法。

附图说明

图1为显示了纤维素酶高产菌株的筛选流程的示意图。

具体实施方式

本发明提供了一种筛选纤维素酶高产菌株的方法，其中，该方法包括：将含有菌种的多个样品置于产纤维素酶的产酶培养基中培养3-7天，之后检测产生的酶的活性；选择产生的酶的活性较高的样品的富集培养物涂布在土豆汁固体培养基上培养直至产生菌落，挑取产生的菌落并分别置于产纤维素酶的产酶培养基中，培养3-7天后；检测各菌落产生的纤维素酶的活力，根据所得活力确定纤维素酶高产菌株。

根据本发明，所述含有菌种的样品选自各种可能含有产纤维素酶菌种的环境中，例如，所述含有菌种的样品可以选自土壤样品、腐烂木屑样品、腐烂纸质样品、腐烂布料样品、水样品、以及纤维素活力较高的极端环境样品所组成的组中的一种或几种。优选情况下，所述含有菌种的样品选自由腐烂木屑样品、腐烂布料样品、以及纤维素活力较高的极端环境样品所组成的组中的一种或几种。

根据本发明，用于检测酶活力的方法为本领域技术人员所公知，例如，可以通过二硝基水杨酸显色法(DNS法)，根据显色的深浅来判断酶活力的高低，颜色越深酶活力越高，颜色越浅酶活力越低。

所述纤维素酶的种类为本领域技术人员所公知，例如，所述纤维素酶可以选自由滤纸酶、外切葡萄糖苷酶、内切葡萄糖苷酶、β-葡萄糖苷酶、以及纤维二糖酶所组成的组中的一种或几种。

下面通过实施例的方式对本发明进行更加详细的说明。需要理解的是以下实施例的给出仅是为了起到说明的目的，并不是用于对本发明的范围进行限制。本领域的技术人员在不背离本发明的宗旨和精神的情况下，可以对本发明进行各种修改和替换。

实施例1

以1∶50的重量比，将腐烂木屑样品、腐烂纸质样品、腐烂布料样品，分别添加到产滤纸酶的富集产酶培养基中培养4天，之后检测含有不同样品的培养基中滤纸酶的活力，将滤纸酶活力高的样品的富集培养物涂布在PDA(土豆汁固体培养基)培养基上进行培养，直至长出菌落，挑取产生的菌落并分别置于产滤纸酶的培养基中培养4天，之后检测滤纸酶的活力，选取滤纸酶活力最高的菌株。

通过此实验筛选得到菌株为青霉，滤纸酶活力为1.5IU/ml。

实施例2