[发明专利]新的神经毒性的分子靶

说明书

本申请为国际申请日2002年8月13日、国际申请号PCT/FR02/02861于2004年2月13日进入中国国家阶段、申请号02815840.7、发明名称“新的神经毒性的分子靶”的分案申请。 

本发明涉及生物学，遗传学和医学领域。本发明具体涉及检测，鉴定和/或治疗(或者控制)神经退行性疾病，尤其是肌萎缩侧索硬化症的新方法。本发明同时涉及鉴定或者筛选对这些疾病有活性的化合物的方法。本发明进一步涉及用于实施上述方法的化合物，基因，细胞，质粒或者组合物。本发明主要来自于鉴定磷酸二酯酶4B在这些疾病中的作用并且描述了磷酸二酯酶4B作为这些病症中的靶或者治疗、诊断或者试验标记的应用。 

很多神经退行性疾病被描述为具有与兴奋毒性现象相关的组分或者阶段。这种情形诸如阿默氏症，帕金森症，多发性硬化和亨汀顿舞蹈症。 

肌萎缩侧索硬化症(或者称作ALS)是伴随着不同类型的诸如路易士小体的包含体，并且特征在于脊髓和皮层运动神经元的细胞程序性死亡的神经退行性疾病，所述皮层运动神经元的死亡有时相关于额叶性痴呆症。没有突变记述的散发形式和与编码超氧化物歧化酶的SOD1基因的突变相关的家族性形式(FALS)共存。大多数病例是散发的，家族性形式(FALS)非常少见。很可能是长时间的无症状时期存在于临床症状出现之前，这些临床症状多变并难以分类。未来在治疗上的发展将使得用基于疾病分子原因的治疗策略代替症状性治疗成为可能。在细胞水平，这些症状相关于皮层运动神经元和脊髓运动神经元的死亡。这种神经元的死亡已经与不同的现象联系起来，这些现 象是多种神经退行性疾病的基础。诸如与谷氨酸，氧化应激，针对神经元标记(在ALS情况下的钙通道)的自身免疫，以及细胞骨架异常联系起来的兴奋毒性的情况。虽然这些现象是已知的，但是包括ALS的这些疾病的一个或者多个病因仍然不清楚。即使FALS相关于编码超氧化物歧化酶的SOD1基因的突变，但是神经元开始进行细胞死亡的机制还是未知的，所述细胞死亡中至少一种是细胞程序性死亡。 

阐述参与涉及细胞死亡的不同现象的分子事件将许可开发新的治疗策略。利用人活体组织检查样本很难进行这些事件的研究。这些活体组织检查样本显然来自于死后样品，这些样本的质量很难控制并且仅仅反应疾病的最后阶段出现的病理状态。 

动物模型提供的生物样品使得不同发病阶段的分析和与健康对照的比较成为可能。就这一点来讲，如果使用许可获自西北大学(Northwestern University)，表达携带在FALS中普遍流行的一种突变(突变G93A)的人SOD1基因的转基因小鼠可获自Jackson实验室。这个模型在120天内重现具有类似于人类疾病的那些症状的疾病的致死结果。相关于SOD1基因的突变G93A的ALS症状的出现并非产生于超氧化物歧化酶活性的降低而是由于酶产生自由基能力的增强引起的。尽管拥有了这方面的认识，控制ALS不同阶段的分子事件依然知之甚少。这些分子事件的复杂性反应了疾病的进展：在所研究的转基因模型中，在30天没有观察到神经元的异常或者临床表现。60天是症状出现不久之前的一个阶段，但是大脑已经具有细胞生理改变的特征，诸如线粒体代谢的改变，与兴奋毒性现象相关的应激和神经元死亡。在90天，50％的皮层和脊髓运动神经元死亡并且伴随着星形胶质细胞的激活开始了神经元细胞程序性死亡的活动过程。在这个阶段不再观察到兴奋毒性的现象。神经元死亡与半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶(caspase)的激活相关，所述半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶的激活似乎没有参与疾病的早期阶段。 

阐明特异于疾病不同阶段的不同分子事件应允许鉴定新的治疗靶以及新的治疗标记。进行这种鉴定的一种最有效的方法在于鉴定基因和蛋白，所述蛋白的表达表征了病理生理状态。 

本发明描述了鉴定参与兴奋毒性现象和神经元死亡的遗传事件。因此，本发明给相关于这些现象的疾病提供了新的治疗和诊断方法以及鉴定活性化合物的新的靶子。 

更具体而言，对于提取自大脑和脊髓样品的RNA已经进行了定性差异分析，没有预先提取神经元目的是考虑与疾病发展相关的最大程度的选择性剪接事件。根据DATAS的方法(描述于申请WO99/46403中)通过定性差异筛选进行分析，所述方法具有无与伦比的优点。