[发明专利]前极核性白内障致病基因及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及的是一种人体变异的基因，具体地说是一种前极核性白内障致病基因CRYAA。本发明还涉及这种变异基因在检测疾病中的应用。

背景技术

先天性白内障(congenital cataract，CC)是一种常见的眼部异常，可导致明显的视力障碍或者儿童盲，约占世界儿童盲的1/10。先天性白内障可以孤立发生，可以合并其它眼部发育异常，或者是遗传性多系统综合症的一部分。大约1/3-1/4的先天性白内障是遗传性的，常染色体显性、常染色体隐性和X-连锁三种遗传方式都有报道。遗传性先天性白内障大多是常染色体显性，几乎完全外显但是表现度各不相同。尽管先天性白内障是世界儿童盲的主要原因，其遗传基础和发病机制尚不十分清楚。对先天性白内障致病基因的定位与克隆是了解其发病的分子机制的重要步骤。

近年来，随着分子生物学技术和生物信息学的迅猛发展，越来越多的先天性白内障致病基因被定位和克隆。迄今为止，对常染色体显性遗传先天性白内障，已明确定位的位点有30余个，已找到的致病基因有20余个。先天性白内障的致病基因目前可以分成5类：(1)晶体蛋白基因，包括CRYAA，CRYAB，CRYBB1，CRYBB2，CRYBB3，CRYBA1/A3，CRYBA4，CRYGC，CRYGD，和CRYGS。(2)膜蛋白基因，包括MIP，LIM2.(3)缝隙连接蛋白基因，包括GJA8，GJA3。(4)细胞骨架蛋白基因，包括BFSP1，BFSP2。(5)发育调节因子基因，包括PITX3，MAF，HSF4，FOXE3，EYA1，CHX10和PAX6等。

中国专利申请200710144506.X公开了CRYGC基因变异与先天性核性白内障的关系，CRYGC基因第3外显子第470碱基一个G-＞A的点突变，导致编码第157位色氨酸的密码子变成了终止密码子(W157X)。并确定该点突变是先天性核性白内障的致病基因突变。

由于先天性白内障的临床症状及实验室检测指征具有许多类型，而且研究显示，不同的临床类型分别与不同的基因突变相关。即使是同一基因，点突变的位点不同，由此导致先天性白内障的症状就有可能不同。因此有必要对白内障的各种临床类型，尤其是还没有发现相关的分子遗传学基础的临床类型进行研究，以确定其精确的变异基因名称和位点，并根据该变异建立起方便、快速和准确的检测方法，用于先天性白内障的诊断。

发明内容

本发明的目的在于提供前极核性白内障的致病基因，定位出该疾病的基因突变位点，并利用该基因突变，提供检测人体中是否存在该基因突变的方法。

本发明针对一个前极核性白内障家系，用基因扫描与连锁分析的方法对致病基因进行染色体定位和候选基因突变检测。在排除了大部分先天性白内障相关染色体区域后，将致病基因初步定位于第21号染色体。经过精确定位，将致病基因定位于染色体21q22.11-q22.3。通过对此定位区域内先天性白内障的候选基因CRYAA基因双向测序发现一个新的点突变。通过对家系正常成员和100名正常对照GJA3基因测序未发现此突变，排除了单个核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNP)的可能性。从而确定CRYAA基因突变是前极核性白内障的致病基因突变。由此，

本发明提供了一种如SEQ ID NO：1所示的变异的人类CRYAA基因，其特征在于，所述CRYAA基因第3外显子第347位碱基的G突变为A。正常的人类CRYAA基因如SEQ ID NO：2所示。

本发明还提供了一种含有上述述基因的点突变的核苷酸，其特征在于，所述核苷酸含有从点突变向两侧或一侧延伸至少50个以上至1000个碱基之间长度的核苷酸。

本发明进一步提供了所述的核苷酸，其特征在于，所述核苷酸含有从点突变向两侧或一侧延伸至少300-600个个碱基之间长度的核苷酸。

本发明还提供了一种检测来源于人体的生物样本中是否存所述基因的点突变的方法，其包括步骤：

(1)从所述样本中提取和纯化基因材料；

(2)对所述基因材料进行聚合酶链扩增反应，获取产物；

(3)对所述产物进行核苷酸序列测定，以确定所述生物样本中是否含有CRYAA基因的点突变。

优选地，所述生物样本为体液，所述体液包括但不限于：血液、血清、羊水、淋巴液等。

优选地所述体液为血液。