[发明专利]一种畜用肽苗及其制备方法

权利要求书

1、一种抗口蹄疫病毒的肽疫苗，其特征在于肽抗原具有如SEQ IDNO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列。

2、根据权利要求1所述的肽苗，其特征在于如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：3所示氨基酸序列的肽抗原结构是由口蹄疫病毒VP1上130-168位的B细胞表位与如SEQ ID NO：4所示氨基酸序列的外源T细胞表位构成，两个表位间的接头氨基酸序列为Lys-Lys。

3、根据权利要求1所述的肽苗，其特征在于如SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的肽抗原结构表示为：VP_1130-168-Lys-Ala-Lys-Lys-Ala-Lys-VP_1 130-168，是由口蹄疫病毒VP1上130-168位的两个B细胞表位串联而成，串联接头氨基酸序列为：Lys-Ala-Lys-Lys-Ala-Lys。

4、根据权利要求3所述的肽苗，其特征在于抗口蹄疫病毒的肽抗原还可以由该型口蹄疫病毒VP1上130-168位的两个B细胞表位串联后的SEQ ID NO：2和如SEQ ID NO：4所示氨基酸序列的肽构成。

5、根据权利要求4所述的肽苗，其特征在于抗口蹄疫病毒的肽抗原由SEQ ID NO：2即VP_1 130-168-Lys-Ala-Lys-Lys-Ala-Lys-VP_1 130-168肽和如SEQ ID NO：4所示氨基酸序列的肽按照摩尔比为1：2的比例构成。

6、根据权利要求1至5所述的肽苗，其特征在于如SEQ ID NO：4所示氨基酸序列的外源T细胞表位来源于小反刍兽疫病毒。

7、根据权利要求1至6所述的肽苗，其特征在于采用化学合成的方法制备合成肽抗原。

8、根据权利要求1至6中任一项所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗中还包含佐剂。

9、权利要求1至6中任一项所述的多肽及其混合物在制备预防和/或治疗口蹄疫的药物中的用途。

10、一种根据权利要求1至6中任一项所述的多肽制备疫苗的方法，主要包括以下步骤：

(1)抗原肽的化学合成；

(2)抗原肽的裂解、沉淀；

(3)高压液相色谱分离纯化多肽抗原；

(4)疫苗配置。

11、根据权利要求10所述的疫苗制备方法，抗原肽的化学合成其特征在于，是以氨基树脂和9芴甲氧羰基(Fmoc)氨基酸为原料，逐步接上氨基酸，每步接肽反应后用乙酰咪唑封闭未反应的活性氨基端，主要包括如下步骤：

(a)FMOC基团脱除：用含15％-35％六氢吡啶的二甲基甲酰氨(DMF)溶液在20-26℃条件反应20-40分钟脱除氨基上保护的FMOC基团，氮气吹干，二甲基甲酰氨(DMF)洗涤树脂；

(b)接肽反应：加入1-羟基苯丙三氮唑(HOBT)、苯并三氮唑-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)、二异丙基乙胺(DIEA)与FMOC保护的氨基酸在20-28℃条件反应0.5-2.5小时，氮气吹干，二甲基甲酰氨(DMF)洗涤树脂；

(c)封闭反应：使用1.5％-3.5％的乙酰咪唑在20-26℃条件反应15-30分钟。

12、根据权利要求10所述疫苗的制备方法，其中所述多肽抗原裂解所用试剂为：三氟乙酸(TFA)/苯酚(Phenol)/H2O＝90/8/2，裂解时间为1-3小时。

13、根据权利要求10所述疫苗的制备方法，特征在于，疫苗配制的方法包括如下：

(a)用注射用水将肽抗原稀释到30-200ug/ml；

(b)将油佐剂高压灭菌后备用。

(c)在20-28℃条件下将抗原水相与油佐剂按照5：5的比例进行乳化，分装后即得到肽疫苗。