[发明专利]诱导家蚕产生抗菌肽的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗菌肽的诱导方法，尤其是一种家蚕抗菌肽的诱导方法。

背景技术

抗菌肽是生物体免疫防卫系统产生的一类对抗外源性病原体致病作用的防御性多肽活性物质，是生物体先天免疫的重要组成成分，具有广谱抗菌活性。抗菌肽除了抗细菌外，还具有抗病毒、抗真菌和抗肿瘤作用，是很好的天然抗菌药物来源，具有相对分子质量小，热稳定性好，无免疫原性，抗菌广谱等特点。抗菌肽还是一种无毒副作用、无残留、无细菌耐药性的环保型制剂，具有热稳定、水溶性好、广谱杀菌等优点，且对畜禽具有促生长、保健和治疗疾病的功能。因此，抗菌肽的应用前景被人们所看好。目前技术中抗菌肽的诱导，有的使用的材料为家蝇，有的使用的材料为蚯蚓。但所能得到的抗菌肽较少，并且诱导的难度也较大。

发明内容

本发明的目的是提供一种诱导家蚕产生抗菌肽的方法，以解决目前抗菌肽诱导难度大，所得到抗菌肽少的问题。

为了达到上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种诱导家蚕产生抗菌肽的方法，其特征在于：依次进行以下步骤：

(1)在家蚕的环节部位注射微量0.05ul～0.5ul的细菌或病毒；

(2)正常饲养12-36小时后，放到-20～-40℃环境中冷冻保存；

(3)取出剪碎、捣碎、匀浆，提取其中的家蚕抗菌肽。

一种诱导家蚕产生抗菌肽的方法，其特征在于：所述的方法为使家蚕饥饿，所述方法的步骤为：

(1)对家蚕不喂桑叶，让其饥饿24-48小时；

(2)然后正常饲养12-36小时后，放到-20～-40℃环境中冷冻保存；

(3)取出剪碎、捣碎、匀浆，提取其中的家蚕抗菌肽。

所述的诱导家蚕产生抗菌肽的方法，其特征在于：正常饲养24小时后，放到-30℃环境中冷冻保存。

所述的诱导家蚕产生抗菌肽的方法，其特征在于所述的细菌或病毒是指大肠杆菌、沙门氏菌、NPV病毒。

所述的诱导家蚕产生抗菌肽的方法，其特征在于：对家蚕不喂桑叶，让其饥饿48小时；然后正常饲养24小时后，放到-30℃环境中冷冻保存。

本发明所涉及的家蚕抗菌肽的诱导方法简单，易于实施，并且能产生较多的抗菌肽，大大提高了抗菌肽的提取效率。

具体实施方式

例1

一种家蚕抗菌肽的生产方法：

(1)给家蚕环节部位注射微量0.05ul～0.5ul的沙门氏菌或NPV病毒；

(2)正常饲养24小时后，放到-30℃环境中冷冻保存；

(3)取出剪碎、捣碎、匀浆，提取其中的家蚕抗菌肽。

例2

一种家蚕抗菌肽的生产方法：

(1)对家蚕不喂桑叶，让其饥饿48小时；

(2)然后正常饲养24小时后，放到-30℃环境中冷冻保存；

(3)取出剪碎、捣碎、匀浆，提取其中的家蚕抗菌肽。

抗菌肽的提取采用乙酸浸提法。取用不同处理过的五龄家蚕分别称重、冷冻、剪碎并用组织捣碎机捣碎、匀浆。然后用等体积5％乙酸混合，4℃条件下搅拌过夜后隔水煮沸15min，迅速冷却。混合物在4℃条件下8000rpm，离心30min，取上清液，4℃条件下保存。沉淀物用等体积5％的乙酸混合，再次于4℃搅拌、浸提过夜，重复上述离心过程，取上清，合并两次上清液，调整pH值，再次离心，弃沉淀，上清液冷冻干燥即为家蚕抗菌肽类物质的粗制品。取上清液于另一具塞塑料离心管内于低温下保存(若不立即进行抗菌物质的测定，可以在-20℃的冷冻箱内保存30d)。

用不同方法对家蚕进行诱导产生的抗菌肽略有差别

  诱导方法  注射法  饥饿法  正常家蚕  抑菌圈直径(mm)  2.1  2.3  1.4