[发明专利]猪仔笠异黄酮类化合物及其提取方法与应用

说明书

技术领域：

本发明涉及猪仔笠异黄酮类化合物的提取方法，属于医药领域。

背景技术：

猪仔笠属名Eriosema chinense Vog，为豆科毛瓣花属植物，约100种，分布于热带和亚热带地区。据《中药大词典》记载：猪仔笠块根入药，具有清热解毒、生热烦渴、化痰润肺、止咳之功效，而且是治疗伤风咳嗽、止呼吸道感染、发热烦渴、痢疾、跌打损伤等疾病的珍稀名贵中草药。猪仔笠主要用于治疗咳嗽、哮喘，疗效显著，安全可靠，价廉而方便，是一种良好的中草药资源，值得开发研究和推广运用。猪仔笠虽然已在民间应用较广，但对猪仔笠的有效成分以及生物活性的研究未见有关文献报道，猪仔笠的临床用药机理尚不明确，仅凭经验，这就限制了其在临床上的应用范围而没有得到充分有效的开发利用。同时，由于其主要活性成分不明，就无法对猪仔笠的有效成分进行检测、对药材质量进行有效控制和道地药材进行权威鉴定。

在中药的诸多研究中，对活性成分、药理作用和药效与成分关系的研究较少，所以无法阐明中药治疗疾病的药效物质基础和作用机理等重要科学问题，也无法为寻找新药物或合成新药提供先导物或结构母核，无法提升中药新药研究方法和技术水平。因此深入、系统和有效地分离、纯化、结构鉴定以及活性的追踪验证是开展和加强中药药效物质基础和作用机理系统研究的必然。而在传统的分离技术基础之上，积极探索和应用新的分离方法和技术是加速中药药效物质基础和作用机理系统研究的发展趋势。

开展对猪仔笠药理活性成分的研究，掌握猪仔笠被广泛用于治疗咳嗽、化痰的药效物质基础，可为猪仔笠治疗咳嗽、化痰的药理研究和临床应用提供参考，为探索该属植物的活性成分及其化学分类学方面提供借鉴。

发明内容：

本发明的目的是提供一种猪仔笠异黄酮类化合物的提取方法。

本发明所述的猪仔笠异黄酮类化合物，具有下述结构的异黄酮类化合物，本发明以化合物5表述。本发明所采用的高速逆流色谱法(High-speed Countercurrent Chro-matography)，简称“HSCCC”，下同。

本发明所述的猪仔笠异黄酮类化合物的提取方法为：包括如下步骤：

1)将猪仔笠块根粉碎，用乙醇回流提取获得乙醇提取液，将乙醇提取液减压浓缩得浸膏，浸膏加入水混悬得混悬液，混悬液用石油醚萃取，把经石油醚萃取后留下的混悬液再用醋酸乙酯萃取获得醋酸乙酯萃取液，减压浓缩醋酸乙酯萃取液得醋酸乙酯浸膏；2)将醋酸乙酯浸膏用正己烷∶醋酸乙酯∶甲醇∶水混合溶剂体系的下相溶解后得溶解液，可取等体积的上相萃取该溶解液多次，至上相萃取液为无色或几乎无色为止，不要上相萃取的萃取液，只把下相部分蒸干即得醋酸乙酯浸膏II；3)醋酸乙酯浸膏II经过制备型HSCCC在正己烷∶醋酸乙酯∶甲醇∶水按适宜体积比例的溶剂体系下分离，获得色谱峰，其中只有一个峰5的峰型对称且含量较高的组分流出液，通过手工收集该组分流出液，本发明可通过自然蒸发流出液的部分溶剂后析出白色针晶的异黄酮类化合物。

上述步骤2)的醋酸乙酯浸膏用混合溶剂(正己烷、醋酸乙酯、甲醇、水)萃取分离的溶剂体系配比以体积比计量是正己烷∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝3～6∶3～6∶4～8∶2～6。

步骤3)的HSCCC分离的溶剂体系(体积比计量)为正己烷∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝1～6∶2～9∶1～6∶2～8)；固定相为上相；流动相为下相；HSCCC分离流速：0.5～4.0mL·min^-1；转速：500～1500r·min^-1；固定相的保留值不低于50％。

步骤1)粉碎的猪仔笠块根，粉碎的猪仔笠块根，可以用50～100％乙醇浸没药材且液面高出药材约0.5～1cm，在80～95℃和常压力回流提取2～4次，合并乙醇提取液，将乙醇提取液用旋转蒸发仪减压浓缩得浸膏，浸膏加入2～15倍量的水混悬得混悬液，混悬液用0.5～2倍水的石油醚萃取8～12次后所余下的混悬液再用是混悬液量的0.5～2倍的醋酸乙酯萃取8～12次，合并萃取液，采用目前本领域通用的旋转蒸发仪减压浓缩醋酸乙酯萃取液得醋酸乙酯浸膏。当然优选用95％乙醇在优选82～85℃和常压力回流提取三次，合并三次乙醇提取液，将乙醇提取液用旋转蒸发仪减压浓缩得浸膏，浸膏加入3～5倍的水混悬，用0.5～1倍水的石油醚萃取10次后所余下的混悬液再用0.5～1倍余下的混悬液量的醋酸乙酯萃取10次获得醋酸乙酯萃取液，合并获得的醋酸乙酯萃取液，用旋转蒸发仪减压浓缩醋酸乙酯萃取液得醋酸乙酯浸膏。