[发明专利]与MHC-Ⅰ类分子结合的鼠Ⅲ型肝炎病毒多肽表位及应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药工程技术领域，包括筛选获得与主要组织相容性复合物I(MHC-I) 类分子结合的鼠III型肝炎病毒多肽表位，以及编码这些多肽的DNA、RNA，由于这些多肽与 MHC-I类分子的结合位点进行结合，可激活特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL细胞)；因此， 本发明还涉及所述与MHC-I类分子结合的鼠III型肝炎病毒多肽表位在药学上的用途。

背景技术

目前的研究表明，CD8⁺T细胞所识别的靶抗原先经抗原提呈细胞处理，之后以“抗原肽 -MHC I类分子”复合物的形式呈现在抗原提呈细胞或靶细胞表面，相应的与MHC-I类分子结 合的抗原肽即为CTL表位。

小鼠肝炎是由小鼠肝炎病毒(MHV)所致的一种特有的传染病，它广泛分布于世界各国的 实验小鼠群中，鼠群中动物的感染率可为20％-100％，是实验小鼠群中最常见和最重要的病毒 之一，多呈潜伏性感染和慢性感染，发病小鼠主要表现为肝炎、脑炎和肠炎，严重影响实验 小鼠质量，干扰各种动物实验的进行，影响实验结果的准确性和重复性，是对实验小鼠危害 最为严重的病毒病之一。目前尚没有治疗MHV感染的办法，控制MHV感染也非常困难，被MHV 感染的小鼠只有处死，以防止鼠间的大量传播，使得实验成本增高及实验进度受到影响，可 能导致一些珍贵实验动物的濒危。小鼠肝炎病毒(MHV)最早于1949年发现，此后研究者们 先后从小鼠和新生鼠中分离到MHV。MHV是冠状病毒科最大的病毒，是目前已知基因组最大的 RNA病毒。MHV有三个主要结构蛋白，分别为核心蛋白、跨膜糖蛋白和表面蛋白。MHV个毒株 间S蛋白的抗原性差异很大，S蛋白能够形成三聚体结合敏感细胞受体，诱导病毒包膜和细 胞膜之间的膜融合，刺激机体产生中和性抗体和介导细胞免疫应答，且目前普遍认为MHV组 织亲嗜性在很大程度上取决于S蛋白，所以对于病毒感染及防治具有重要意义。Kou L等通 过基因重组技术建立了一株变异的小鼠肝炎病毒，这株小鼠肝炎病毒的S蛋白被猫腹膜炎病 毒(一种以猫为宿主的冠状病毒)的高交叉的S蛋白取代，它具有了感染猫细胞的能力，同 时它丧失了感染鼠细胞的能力，这种通过取代外周S蛋白能跨越宿主细胞间种间屏障的现象， 有力证明了冠状病毒感染宿主细胞范围最主要是由S蛋白与病毒受体的相互作用水平有关。 不同的MHV病毒株能够表现出不同的组织亲嗜性，主要分为嗜肝性和非嗜肝性两类。MHV-A59 及MHV-3为嗜肝性病毒，感染小鼠后多发展为急性或慢性肝炎。用T1寡合氨酸图解发现MHV-3 和MHV-A59的基因组序列中仅有少数几处差异，这种基因组序列上的差异构成了MHV-3较 MHV-A59更具嗜肝性。综上所述，MHV-3的S蛋白与小鼠肝炎的发生发展密切相关，若将MHV 病毒的S蛋白作为抗原，采用生物信息学手段，研究其CTL表位，并将其作为免疫治疗的一 个新靶点，对小鼠的MHV感染起到免疫保护及免疫治疗效果，从而预防鼠类MHV感染及治疗 小鼠肝炎。到目前为止，该方面研究未见有文献报道。

随着对免疫应答分子机制研究的深入，人们已逐渐认识到机体的免疫细胞并不是对应于 各种各样的病原体或天然抗原的整体分子，而是针对各种各样抗原分子的抗原表位。蛋白质 抗原是通过其表位来体现其免疫特异性。

发明内容

本发明的目的是提供能与MHC-I类分子的结合位点进行结合、可激发特异性细胞毒性T 淋巴细胞的鼠III型肝炎病毒多肽表位。

本发明的另一目的是提供所述多肽表位在制备用于鼠类肝炎病毒治疗药物和治疗或检测 疫苗中的用途。

本发明根据抗原肽与MHC-I分子相互作用的机理，从鼠III型肝炎病毒S蛋白全长基因 序列中筛选出候选多肽表位，最终得到能有效与MHC-I类分子结合并能激发特异性T淋巴细 胞的多肽表位，该多肽表位长度仅8个氨基酸序列，体外容易合成，方便临床应用。

为实现本发明第一目的而采用的技术方案是这样的，既能与人MHC-I类分子的结合位点 进行结合，可激发特异性的细胞毒性T淋巴细胞的多肽表位，筛选自序列号为：SEQ NO.1的 鼠III型肝炎病毒S蛋白，为与SEQ NO.1的鼠III型肝炎病毒具有同源性的下列氨基酸序列， 包括：

SEQ NO.2：Tyr Glu Leu Ser Gly Tyr Thr Val；

SEQ NO.3：Ile Glu Pro Tyr Asn Gly Val Ile；