[发明专利]肿瘤抗原Ran HLA-A*0201限制性模拟CTL表位及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种肿瘤抗原模拟表位，特别涉及肿瘤抗原Ran HLA-A^*0201限制性模拟细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic T lymphocyte，CTL)表位，还涉及该模拟CTL表位的应用。

背景技术

恶性肿瘤是当前威胁人类生命健康的几大主要疾病之一，其发病率和死亡率呈逐年上升趋势，位居我国城市居民死亡原因的第一位，对其采取有效的预防和治疗已经迫在眉睫。目前，临床上治疗肿瘤的主要方法包括手术切除、放射治疗和化学药物治疗，但这些方法对某些肿瘤，特别是晚期恶性肿瘤的治疗效果还不能尽如人意。近年来迅速发展起来的肿瘤特异性免疫治疗和肿瘤治疗性多肽疫苗，基于肿瘤抗原的CTL表位，以主动免疫方式，体内激活免疫系统，诱导产生特异性CTL杀伤肿瘤细胞，而对正常组织无损害，是一种完全、有效的肿瘤治疗方法。已有众多文献报道，肿瘤抗原的CTL表位在体外、体内均可有效诱导特异性杀瘤CTL的产生，使部分肿瘤患者的肿瘤缩小，生存期延长。因此，肿瘤抗原的发现及其CTL表位的鉴定成为肿瘤特异性免疫治疗以及肿瘤治疗性多肽疫苗研制的重要前提。

Ran(ras-related nuclear protein)是由216个氨基酸组成的GTP酶，大量分布于细胞核内，参与调控细胞周期中各个时期的许多细胞生命活动，包括细胞核重建、DNA复制、细胞核物质转运和细胞分裂时纺锤体的组装等，为Ras类原癌基因超家族的重要成员。近来文献报道，Ran是一种肿瘤相关抗原，在RNA水平上广泛表达于多种肿瘤和正常组织中，但在蛋白水平上仅在肿瘤组织中表达，与肿瘤的恶性转移和增殖密切相关，是恶性肿瘤特异性免疫治疗的良好靶标。鉴于HLA-A^*0201是中国人群和北美高加索人种最常见的HLAI类分子型别(阳性率分别高达50％和98％)，因此，Ran HLA-A^*0201限制性CTL表位的鉴定及其肿瘤治疗性多肽疫苗的研制更具现实意义和应用价值。

本发明人在前期研究中(Ran HLA-A2.1限制性CTL表位的预测和初步鉴定.李凡等.免疫学杂志，第22卷第3期，2006年5月)应用超基序和量化基序相结合的方法对Ran HLA-A^*0201限制性天然CTL表位进行了预测，得到4个候选天然表位，分别是YVATLGVEV、TLGVEVHPL、IMFDVTSRV和VLCGNKVD，并对4个候选天然表位与HLA-A^*0201分子的亲和力和结合稳定性分别进行了分析，亲和力实验结果显示YVATLGVEV、TLGVEVHPL和IMFDVTSRV与HLA-A^*0201分子有中等亲和力而VLCGNKVD无明显亲和力；结合稳定性实验结果显示IMFDVTSRV的结合稳定性最好而YVATLGVEV和TLGVEVHPL的结合稳定性较差。

免疫原性弱是天然CTL表位作为肿瘤治疗性多肽疫苗应用的障碍之一。如何提高天然CTL表位的免疫原性成为肿瘤治疗性多肽疫苗发展的关键。目前，在众多肿瘤治疗性多肽疫苗的增强策略中，对天然CTL表位进行分子改造被认为是最有前景的方法之一。由于CTL表位与主要组织相容性复合体(MHC)I类分子的结合是诱导CTL免疫应答的关键因素，而CTL表位与MHC I类分子结合的重要基础是锚着残基，因此，可以通过改变锚着残基或其相邻位置的氨基酸残基达到增强免疫原性而特异性不受影响的目的。

发明内容

有鉴于此，为克服现有技术存在的不足，本发明的第一个目的在于对前期研究中经预测和初步鉴定的Ran HLA-A^*0201限制性天然CTL表位进行改造，并通过亲和力实验和细胞毒性实验等筛选出免疫原性增强而特异性不受影响的模拟CTL表位，为肿瘤治疗性多肽疫苗的研制奠定基础。

为达到此目的，在本发明的第一方面，提供了肿瘤抗原Ran HLA-A^*0201限制性模拟CTL表位，由Tyr-Met-Phe-Asp-Val-Thr-Ser-Arg-Val(SEQ ID No.1)氨基酸序列组成。

本发明的第二个目的在于提供一种肿瘤治疗性多肽疫苗。

为达到此目的，在本发明的第二方面，提供了一种肿瘤治疗性多肽疫苗，含有免疫学有效量的所述肿瘤抗原Ran HLA-A^*0201限制性模拟CTL表位。

进一步，还含有药学上可接受的载体。