[发明专利]多球壳菌素粗品的化学分离纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及多球壳菌素粗品的分离纯化方法，特别涉及多球壳菌素粗 品的化学分离纯化方法。

背景技术

多球壳菌素具有多种药理作用。Fujita等研究显示，多球壳菌素具有 显著的双向免疫调节作用，能阻断白介素-2受体以下的途径，抑制丝氨酸 棕榈酰转移酶活性，从而特异性抑制T细胞的增殖。另外，Hojjati等报道 多球壳菌素可抑制动脉粥样硬化形成，利用多球壳菌素抑制鞘脂类合成的 关键酶——丝氨酸棕榈酰转移酶的机理，连续60天对8周龄的动脉粥样硬化 的大鼠每隔一天注射浓度为0.3mg/kg多球壳菌素，结果显示多球壳菌素对 鞘脂类的合成有明显的抑制作用，该大鼠动脉硬化损伤面积明显减少，因 此，多球壳菌素抑制丝氨酸棕榈酰转移酶活性可能作为治疗动脉粥样硬化 的一个选择。基于多球壳菌素的药理价值及临床应用前景，制备医药工业 所需的高纯度多球壳菌素具有重要意义。多球壳菌素内酯也具有与多球壳 菌素相似药理作用。

目前关于多球壳菌素分离纯化方法的报道都不是采用化学分离纯化方 法，Fujita等(Fungal metabolites.Part 11.A potent immunosuppressive activity found in Isaria sinclairii metabolite.Fujita T，et al.J.Antibiotics，1994， 47(2)：208～215)采用免疫抑制细胞模型活性跟踪，通过联用大孔吸附树 脂和制备薄层色谱分离纯化获得多球壳菌素。Kluepfel等(Myriocin，a new antifungal antibiotic from Myriococcum albomyces.Kluepfel D，et al.Journal of Antibiotics，25：109～115，1972)以水-甲醇-二氯甲烷采取液液萃取结晶 工艺纯化多球壳菌素；该方法工艺简单，然而得率低，重复性差，操作技 术难度大。这些方法不足之处在于不适宜工业化。目前关于多球壳菌素内 酯制备方法的报道中，文献(Fungal metabolites.Part 12.Potent immuno- suppressant，14-deoxomyriocin，(2S，3R，4R)-(E)-2-amino-3，4-dihydroxy- 2-hydroxymethyleicos-6-enoic acid and structure-activity relationships of myriocin derivatives.Fujita et al.Journal of Antibiotics，47：216～224，1994) 提供了一种以多球壳菌素甲醇溶液与氯化氢甲醇溶液反应，反应物以硅胶 为色谱介质，以氯仿-甲醇为洗脱剂洗脱，随后以氯仿-石油醚结晶，制备 多球壳菌素内酯单体的方法。如将该方法用于分离纯化多球壳菌素粗品是 不可行的，因为该方法是采用多球壳菌素单体制备多球壳菌素内酯，需先 制备多球壳菌素单体。目前还没有使用化学方法进行分离纯化多球壳菌素 粗品的报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种能简化产品后续纯化流程、提高得率、降低 能耗、适合工业化的多球壳菌素粗品的化学分离纯化方法。

本发明采用的技术方案如下：多球壳菌素粗品的分离纯化方法，包括 以下步骤：

(1)取多球壳菌素重量含量是2～50％的多球壳菌素粗品用无水乙醇 溶解后硅胶柱色谱分离，用溶剂A与酸催化剂的混合溶液洗脱，收集多 球壳菌素内酯馏分；其中所述溶剂A与酸催化剂的体积比为6～12.5∶ 0.2～1.5；所述溶剂A是选自乙酸乙酯、丙酮、无水乙醇、甲醇、正丁 醇中的一种或多种按任意比例组成的溶剂，所述酸催化剂是甲酸或乙酸 中的一种；

(2)将步骤(1)所得的多球壳菌素内酯馏分蒸干，剩余物用溶剂B 结晶，收集晶体，得多球壳菌素内酯单体；其中所述溶剂B是选自乙醇、 甲醇、水中的一种或多种按任意比例组成的溶剂；

(3)取多球壳菌内酯单体置于碱和水中形成反应体系，多球壳菌素 内酯单体在碱性条件下与水完全反应，得到多球壳菌素溶液，然后将该 溶液蒸干得剩余物即为分离纯化的多球壳菌素单体；其中所述碱是吡啶 或氨水中的一种。