[发明专利]一株耐热产漆酶杈戴氏霉菌株及其产漆酶培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及微生物，进一步来说，涉及漆酶；具体而言，涉及耐热产漆酶杈戴氏霉菌株，还涉及其产漆酶培养方法。 

背景技术

漆酶(Laccases)是一种结合多个铜离子的蛋白质，属于铜蓝氧化酶，不仅存在于漆树的分泌物中，而且广泛地存在于多种植物、昆虫和高等真菌中。其中担子菌纲的白腐菌是漆酶的主要产生者。分泌漆酶的真菌主要集中在担子菌门、子囊菌门以及半知菌类等高等真菌，其中最主要的是担子菌门的白腐真菌。在半知菌中，对漆酶的研究报道不多。特别是在拟青霉属中，仅报道了膨大拟青霉Paecilomyces inflatus具有分解木质素的能力。近年来，漆酶的研究引起了社会的重视，在中国专利申请件中，就有03156878.5号“一种漆酶及其编码基因与工程菌”、200310118373.0号“一种血红密孔菌GW菌漆酶的制备方法”、200410034016.0号“一种漆酶及其生产方法与专用生产菌株”、200410007200.6号“新漆酶的表达载体、表达微生物菌株、表达的漆酶蛋白及其应用”、200510086586.9号“从盐肤木筛选漆酶内生菌及通过固态发酵制漆酶的方法”、200610039351.9号“漆酶高产菌的快速筛选方法”等属于漆酶的生物技术。漆酶在生物纸浆及其漂白、环境污染治理、生物除污、饲料加工及堆肥、食品工业、新能源、有机合成、生物及免疫检测等方面均有广泛的应用。因此，研究与开发产漆酶意义重大。 

发明内容

提供所述菌株产漆酶的培养方法。 

本发明提供的耐高温、产漆酶的杈戴氏霉，属于粪壳菌目、戴氏霉属，菌株为杈戴氏霉Taifanglania furcata GZUIFR-H104.1，菌株保藏号为：CCTCC No：M209119，2009年5月30日在中国典型培养物保藏中心保藏。 

上述杈戴氏霉菌株是从山东烟台大豆地土样中分离而获得，在查氏培养基上，40℃下培养7d，菌落平展，绒毛状，淡灰黄色，背面浅灰色；菌丝宽1.2-3.5μm；无明显的分生孢子梗，瓶梗单生，直接着生在气生菌丝或菌丝突起上，(3.7-)4.0-20.1(-23.3)×1.8-4.5μm，基部椭圆膨大或锥形，顶端突然变细或逐渐变细成长的颈部，长4.7-13.9(-14.8)μm，常二叉形，乃至分枝状。分生孢子光滑，长椭圆或卵形，(3.6-)4.0-7.9×1.9-3.9(-4.3)μm，聚集成长链状。 

本发明提供的上述GZUIFR-H104.1菌株产漆酶的培养方法是：按照以下条件，以葡萄糖为碳源，以碳酸氢铵为氮源，碳氮比为葡萄糖20g/L∶碳酸氢铵2.844g/L，产酶培养温度为40℃，初始pH为6.5，连续培养7天，酶活测定时间为培养的第7天。 

发明人指出：不同金属离子对酶活的影响差异显著。在5mmol/L的浓度下，Mn²⁺，Ca²⁺均表现出明显的增强作用，Fe³⁺，Zn²⁺，Cu²⁺表现出明显的抑制作用。在0.0005-0.05mmol/L的浓度梯度范围内，当Mn²⁺，Cu²⁺为0.5mmol/L时，酶活最高，低浓度的Fe³⁺对菌株产酶稍有增强作用。 

本发明与现有技术相比，具有如下优点和有益效果：本菌株从山东省烟台市大豆土样中分离获得，为中国本土的菌株，并非从国外引进，能适应本地的自然环境。该杈戴氏霉能耐高温、产漆酶，在堆肥、垃圾及食用菌栽培料的处理中具有潜在应用价值。 

附图说明

图1杈戴氏霉GZUIFR-H104.1菌株在查氏培养基上的菌落及产孢结构； 

图2杈戴氏霉GZUIFR-H104.1菌株在测试培养基上氧化带直径与菌落生长比较图(培养5天)； 

图3培养基起始pH对杈戴氏霉GZUIFR-H104.1菌株产漆酶的影响； 

图4培养温度对杈戴氏霉GZUIFR-H104.1菌株产酶的影响； 

图5Fe3+对杈戴氏霉GZUIFR-H104.1菌株产酶的影响； 

图6Cu2+对杈戴氏霉GZUIFR-H104.1菌株产酶的影响； 

图7Mn2+对杈戴氏霉GZUIFR-H104.1菌株产酶的影响。 

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述。 

实施例1菌株的分离鉴定 

1.实验材料与方法