[发明专利]具有抗HIV活性的茶叶提取物的制备与应用方法

说明书

技术领域

本发明涉及天然物质的生物活性成分，具体而言涉及从茶叶中提取的活性物质及其应用的方法。

背景技术

艾滋病严重威胁着人类的健康，对艾滋病的治疗主要是在抗艾滋病病毒方面。临床上尚缺少有效、安全、低毒的抗艾滋病病毒药物。目前，从天然资源中发展新的抗艾滋病病毒药物逐渐成为研究中的一个热点。

茶叶为山茶科植物茶的芽叶，其药用价值历史悠久。《神农本草经》记载了久服茶叶能“安心益气，轻身耐老”；唐代陈藏器《本草拾遗》中说：“诸药为各药之药，茶为万药之药。”明代顾元庆茶谱记载：“饮真茶能止渴、消食、除痰、少睡、利尿道、明目益思、除烦、去腻，人固不可一日无茶”。茶叶中含有茶多酚、茶多糖、生物碱、维生素、氨基酸、有机酸和微量元素。迄今为止，尚无利用茶叶提取抗HIV活性物质的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有抗HIV活性的茶叶提取物的制备方法，从而为制备新的抗HIV药物的研究开发提供基础条件。

本发明的又一目的是提供具有抗HIV活性的茶叶提取物的应用方法。

发明人在研究中首次发现，茶叶中的某些成分具有很好的抑制HIV-LTR序列活性的功效，HIV-LTR序列是艾滋病病毒复制的关键区域，抑制了该序列的活性就能抑制艾滋病病毒复制，从而达到治疗艾滋病的目的。因此，提取具有抗HIV活性的茶叶提取物就是非常重要的任务。

发明人经过反复研究，提供的茶叶提取物的提取方法是：先将茶叶粉碎，得到茶叶粗粉；用水或水溶性有机溶剂浸提取茶叶粗粉，得到提取液；将提取液过滤，滤液用有机溶剂萃取分离；萃取物减压浓缩成清膏，真空冷冻干燥，即得到本发明的茶叶提取物。

上述第一步中，所述的茶叶是干燥茶叶，粉碎后的茶叶粗粉为过40目筛的粉末。

上述浸提过程中，所述水或水溶性有机溶剂加入的量是茶叶粗粉的4～10倍，提取温度为20℃～90℃，提取1～6次，每次5min～5h；所述水溶性有机溶剂是浓度为100％以下的含1～6个碳原子的醇、烷或酯的水溶液。所述提取为浸提或回流提取。

上述萃取分离过程所用的有机溶剂是石油醚、己烷、苯、乙醚、氯仿、二氯甲烷、一氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇等中低极性有机溶剂中的一种或多种；真空冷冻干燥的温度为-80℃，冷冻时间为12h。

HIV的复制和HIV-LTR序列的活性有直接关系，发明人对茶叶提取物在抑制HIV-LTR序列活性方面的作用进行了研究和验证，具体过程如下：

称取已制备好的茶叶提取物10mg，加入适量的、已处理好的含有BF-24细胞的培养基中，其中BF-24细胞是被接有氯霉素乙酰转移酶基因的HIV-LTR序列转染的。上述已加入茶叶提取物的培养基，在37℃条件下培养16h，并以相同条件作对照。通过ELISA实验分析，对照组培养基中的HIV-LTR序列活性良好，而加入茶叶提取物的培养基中的HIV-LTR序列活性在很大程度上都被抑制，说明茶叶提取物具有很好的抑制HIV复制的活性。

本发明的具有抗HIV活性的茶叶提取物的应用方法，是将具有抗HIV活性的提取物与淀粉、可溶性淀粉、微晶纤维素、蔗糖、糊精、环糊精、甘露醇、乳糖、羟丙甲纤维素、乙基纤维素、蒸馏水、乙醇、甘油、蜂蜜、单糖浆、注射用水、注射用油等药物辅料中的一种或多种，按照常规的药剂制备方法制成颗粒剂、或丸剂、或胶囊、或片剂、或口服液、或注射剂，即可用于治疗艾滋病；或者加入糖精钠、甜蜜素、麦芽糖醇、山梨糖醇、木糖醇、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸、山梨酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢铵、苋菜红、胭脂红、柠檬黄、日落黄、焦糖色素、香精、柠檬酸、酒石酸、乳酸、苹果酸、营养强化剂等食品辅料中的一种或多种，按照常规方法制成保健饮料或保健食品，用于预防艾滋病。

本发明首次公开了一种从茶叶中提取得到的具有抑制HIV-LTR序列活性的天然物质，通过实验证明了该提取物对HIV-LTR序列活性的抑制率可达80％以上，可用于制备抗艾滋病病毒的药物。本发明所提供的提取方法简单易行，非常适合推广应用。

具体实施方式

以下实施例可以进一步说明本发明，但实施例并不限定本发明的范围。

实施例1：将干燥的茶叶粉碎，过40目筛，称取150g，加入65％的乙醇溶液1000mL，于室温下浸泡3次，每次72h，合并浸泡液，过滤，滤液用1倍量乙酸乙酯萃取，萃取物在58℃下减压浓缩成清膏后，在-80℃左右真空冷冻干燥12h，即得具有抑制HIV-LTR序列活性的提取物。