[发明专利]针对TRAP-1样蛋白基因的siRNA序列及其用途

说明书

技术领域

本发明属于生物技术，涉及基因工程技术领域和生物信息学领域，具体地涉及针对TRAP-1样蛋白(TLP)基因的siRNA靶序列的设计、合成及其在体外抑制肝脏肿瘤细胞生长、抑制肝纤维化形成的应用。

背景技术

RNA干扰(RNA interference，RNAi)现象的发现，被《SCIENCE》杂志和美国科学促进会评为2002年十大科学成就之一。RNA干扰是指同源双链RNA的导入引起目标基因的不表达或减效表达，在哺乳动物细胞中，21-23个核苷酸长度的双链RNA(double-stranded RNA，dsRNA)，可有效降解同源RNA，从而阻断蛋白质的表达，这些特定长度的dsRNA被称为siRNA(small interfering RNAs)。RNA干扰被称为RNA基础上的细胞“免疫”系统。

经证实RNA干扰技术具有以下特点：(1)特异性高：一个碱基的不同就可导致作用的显著降低；(2)高效：少量siRNA分子就能较彻底抑制细胞内相应基因的表达；(3)稳定：由于RNA干扰采用的是双链RNA，它比较稳定，不易被降解，因此RNA干扰不仅在体外，而且在动物体内亦具有较好的效果；(4)筛选周期短：针对某一基因的有效siRNA序列筛选的方法较简单，因此研发周期较短。

RNAi在HIV的体外实验中取得了较理想的结果。Rossi等将HIV-1编码rev的基因和与它同源的双链RNA共转染293细胞，rev基因的表达被显著抑制；同时将siRNA的抑制效应与反义RNA和核酶等进行了比较，发现只有siRNA组抑制了HIV rev-EGFP的表达，其抑制率达到90％，远优于反义RNA和核酶组，这一结果同样被Novina等学者所证实。Novina等用针对CD4的dsRNA能将细胞表面HIV病毒的受体表达减少75％，从而抵抗HIV病毒的感染。因此，针对病毒基因的siRNA是慢性病毒性感染的最佳治疗策略，具有广阔的应用前景。

目前我国有1.7亿HBV感染者，其中慢性乙肝患者1,700万人，每年有50万人死于HBV引起的肝硬化和肝癌。因此，目前以及今后相当长的一段时间内，针对慢性乙型肝炎——肝纤维化、肝硬化治疗的研究，仍具有十分重要的现实意义。

体内外研究均证实转化生长因子β1(TGF-β1)是促进肝纤维化形成最强的刺激因子之一，是治疗肝纤维化的理想靶点。但是由于TGF-β1体内普遍存在，具有广泛的生物学作用，在细胞生理反应中起核心作用，包括细胞增生、粘附、凋亡、分化和特异性的发展，以及免疫调节等功能，把TGF-β1基因敲除将引起机体内所有与TGF-β1相关的一系列基础功能的缺失或紊乱。更可行的方法是研究TGF-β1信号下传中涉及的效应蛋白和调节蛋白，将他们按照TGF-β1不同的功能进行分类，最终找到阻断TGF-β1某种单一功能的靶点。

Smads通路是TGF-β1信号传导中最重要的通路。其中，Smad2/Smad3是TGF-β1信号下传的重要传导分子。Smad3是介导TGF-β1诱导肝纤维化功能的关键分子，TGF-β1激活的HSC主要表达Smad3，缺失了Smad3的HSC虽然经TGF-β1激活也不能分泌I型胶原，缺失了Smad3的小鼠可以抵抗放射、博来霉素和四氯化碳等各种原因引起的肝纤维化形成。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种针对TRAP-1样蛋白(TLP)基因的siRNA序列，该针对TLP基因的siRNA，可抑制胶原的表达，可用于制备治疗肝纤维化的药物。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种针对TRAP-1样蛋白基因的siRNA序列，其目标RNA靶序列的核苷酸序列为以下任意一种：

TLP-1   5’GCAACAAUUCAUCACAUCdtdt    3’和

TLP-2   5’CCAUGUGGUUUCCCAGUUUdtdt   3’。

dt是脱氧胸腺核苷酸，RNA干扰片段后加两个核苷酸有利于增加干扰效果，一般加dtdt或UU。

本发明还提供了上述针对TRAP-1样蛋白基因的siRNA序列在制备抑制肝脏肿瘤生长和/或抑制肝纤维化药物中的应用。