[发明专利]香蕉苞片花叶病毒实时荧光RT-PCR检测试剂及制备方法和应用

权利要求书

1.香蕉苞片花叶病毒实时荧光RT-PCR检测试剂，其特征在于包含一对特异性引 物和一条特异性荧光探针，扩增目标核苷酸序列的片段长度为74bp，引物和探针序列 为如下所示：

引物：BBrMV TF：5′-caaaaactacgaacagggctagaga-3′

BBrMV TR：5′-ccgagtgtttgatccacgaa-3′

探针：5′-FAM-cacacacgcagatgaaagctgcagc-Eclipse-3′。

2.制备权利要求1所述的检测试剂的方法，其特征在于由下述步骤组成：

(1)选择香蕉苞片花叶病毒CP编码基因的保守片段为靶目标，该保守片段的扩增 目标核苷酸序列为：

caaaaactac  gaacagggct  agagaagcac acacgcagat  gaaagctgca  50

gctattcgtg  gatcaaacac  tcgg                               74

(2)应用primer Express 3.0软件，设计合成引物和探针；

(3)引物和探针的合成采用β-乙腈磷酸胺化学合成法，使用全自动DNA合成仪进 行OligoDNA的合成；

(4)探针合成同时进行两端荧光标记，探针5′端标记的荧光报告基团为FAM，3′ 端标记的是不发荧光的淬灭基团Eclipse；

(5)将设计合成的多对引物和探针进行最佳配对筛选实验后，初步确定候选引物 和探针；

(6)经过大量的反应条件优选、对比试验和验证试验，并经过大量实际样品的检 测应用评估，得到扩增效率和特异性好的所述的引物和探针。

3.权利要求1所述的检测试剂在制备BBrMV实时荧光RT-PCR标准化试剂盒中的 应用。