[发明专利]拟态弧菌显色培养基

说明书

技术领域

本发明涉及一种微生物显色培养基，属于食品卫生微生物安全监测领域。

背景技术

在全世界每年数以亿计的食源性疾病患者中，70％是由于食用了各种致病性微生物污染的食品和饮水造成的。拟态弧菌(Vibrio mimicus)系革兰氏阴性弧菌，具有单鞭毛，有动力，与副溶血弧菌、霍乱弧菌一样，属正常海洋菌，低度嗜盐菌，广泛分布于自然界河水、海水以及海产品中。拟态弧菌是十二种致病性弧菌之一。可引起人类的腹泻、中耳炎、外伤感染和水生生物的弧菌病(Vibriosis)，引起鱼类、甲壳类等水产动物严重的腹水病，还可以通过水产动物或水产品感染人类，引发肠道传染病或食物中毒，主要症状有腹泻、呕吐及腹痛，大便呈水样或粘液血便。发病年龄不限，但小儿少见。发病者多有吃生牡蛎、虾蟹史。在美国、北美、新西兰、孟加拉及非洲国家均有病例报道。我国福建、北京、上海、江苏及浙江地区也有发病。多呈散发或暴发，一年四季均有发病，以夏季为多。潜伏期平均24小时。因此，开展水产品中拟态弧菌的污染情况调查，研究快速分离和检测拟态弧菌的方法，加强对拟态弧菌性引起疾病防治的研究具有重要意义。

准确及时的检测手段是预防和控制拟态弧菌污染和扩散的关键。目前对拟态弧菌检测的方法以传统的微生物学检测为主。常用的选择性培养基主要有NaCl蔗糖琼脂培养基、嗜盐菌选择性琼脂、硫代硫酸钠-柠檬酸钠-胆盐-蔗糖琼脂培养基(TCBS)，这些培养基存在共同问题：特异性低，分离的菌株杂菌较多。如副溶血弧菌、创伤弧菌在TCBS琼脂平板上生长时很像拟态弧菌，只能通过一些繁杂耗时的生化反应把它们区分开来。目前，有些成熟的微生物快速鉴定系统已经被应用于拟态弧菌的检测，得到认可的主要有API 20E和VITEK等，但这些方法所需的仪器和试剂耗材都比较昂贵，检测成本非常高，不利于检测部门与企业的普及应用。

发明内容

针对上述情况，为了克服现有拟态弧菌选择性培养基特异性低的缺陷，本发明提供了一种特异性强的拟态弧菌显色培养基，可对拟态弧菌进行快速检测。

所述拟态弧菌显色培养基，其配方为：酵母膏粉5g、鱼蛋白胨5g、蛋白胨5g、氯化钠10g、柠檬酸钠8～10g、硫代硫酸钠8.5～11g、胆酸钠1～5g、牛胆粉2～7g、蔗糖15～20g、纤维二糖15～20g、阿拉伯糖15～20g、柠檬酸铁1～3g、琼脂12～20g、溴麝香草酚兰0.04g、麝香草酚兰0.04g、蒸馏水1000mL。

优选地，拟态弧菌显色培养基配方为：酵母膏粉5g、鱼蛋白胨5g、蛋白胨5g、氯化钠10g、柠檬酸钠10g、硫代硫酸钠10g、胆酸钠3g、牛胆粉5g、蔗糖20g、纤维二糖20g、阿拉伯糖20g、柠檬酸铁1g、琼脂15g、溴麝香草酚兰0.04g、麝香草酚兰0.04g、蒸馏水1000mL。

所述培养基的pH值为8.0～9.4，优选为8.6±0.2。

本发明根据拟态弧菌的基础营养需求、特殊生态环境、特殊生化反应即酶系统和代谢规律及对特定抑菌物质的耐受性等方面的特点，设计出能够明显区别于其它细菌，特别是其它弧菌和其它常见食品致病菌的拟态弧菌显色培养基。

(1)营养需求和特殊生态环境：由于弧菌属微生物对营养要求不高，但有一定的嗜盐性；因此拟态弧菌显色培养基的酵母膏粉、蛋白胨与NaCl已能满足其营养需求，但通过添加适量的鱼蛋白胨能更好的促进弧菌的生长。

(2)特殊生化反应即酶系统和代谢规律及其指示系统：因拟态弧菌不具有分解纤维二糖、蔗糖或阿拉伯糖的酶系统，即不能分解上述三种糖，在此培养基中产生的代谢产物与指示剂作用，菌落呈绿色或蓝绿色；而其它弧菌所具有的酶系统的则能够分解其中的一种、两种或三种糖，这些糖类的代谢产物与指示剂作用，菌落呈黄色；若一些其它杂菌在拟态弧菌显色培养基上生长，则可以利用柠檬酸铁指示硫化氢的产生，使菌落中心呈黑色。

(3)特定抑菌物质的耐受性：胆酸钠、牛胆粉对革兰氏阳性菌有强大的抑制作用，对革兰氏阴性菌仅有轻度的抑制作用，与枸橼酸钠和硫代硫酸钠合用时，对大肠杆菌群的生长与菌体蛋白质的合成都有抑制作用；

(4)其他因素：NaCl可促进行拟态弧菌的生长，同时也起到了抑制非嗜盐菌的生长；硫代硫酸钠和柠檬酸铁均为还原刘，可以使细菌所产兰的硫化氖避免氧化而使一些菌株代谢产硫化氢气体与柠檬酸铁作用，使菌落中心呈黑色，从而排除这些杂菌；海水中的正常pH值在8.4左右，拟态弧菌显色培养基的pH为8.0～9.4，这样既可以促进行弧菌的生长又可以抑制其它菌的生长。