[发明专利]从含羞草中分离纯化黄酮苷单体的方法

说明书

技术领域

本发明属于中药技术领域，具体为从含羞草中分离纯化黄酮苷单体的方法。

背景技术

含羞草为豆科(Leguminosae)含羞草属植物含羞草(Mimosa pudica)的全草，又名知羞草、怕羞草等，主要分布在我国华东、华南、西南等地的山坡丛林、湿地、路旁，在海南多有分布。含羞草具有清热利尿、化痰止咳、安神止痛、凉血止血之功效，临床多用于急性肝炎、神经衰弱、失眠、肺结核咳血、血尿、带状疱疹等症。含羞草中主要含有黄酮类、酚酸类等成分，在含羞草的较多成分中尤以牡荆苷、荭草苷、异荭草苷的含量较高且活性突出，三种化合物均属于黄酮苷类。研究表明，以上黄酮苷具有抗脂质过氧化、抗衰老、清除自由基、降低血脂及血胆固醇、抗菌消炎、抗病毒、增强免疫功能等多方面的作用。

从含羞草中提取分离上述黄酮苷单体的方法一般是采用一定浓度的含水乙醇进行渗漉提取，得到的提取液经减压浓缩，活性炭脱色，再浓缩后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇多次萃取，然后将乙酸乙酯及正丁醇萃取部位再通过大孔吸附树脂Diaion HP-20柱色谱、Toyopearl HW-40、MCI-Gel CHP-20、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、硅胶柱色谱等反复柱色谱分离纯化后得到，且在提取分离工艺过程中常要用到乙酸乙酯或正丁醇、甲醇、氯仿等有毒溶剂。传统的从中草药中提取纯化牡荆苷、荭草苷、异荭草苷的方法也多是采用醇提取、有机溶剂多次萃取、柱色谱分离或制备、半制备高效液相色谱分离、高速逆流色谱分离制备得到。以上方法均存在操作步骤繁多，工艺复杂、时间长，效率低，设备要求较高，溶剂用量大、价格高且毒性较强，操作安全性低，生产成本较高等缺点。

发明内容

针对现有技术中存在的上述问题，本发明的目的在于设计提供一种操作步骤简单的从含羞草中分离纯化黄酮苷单体的方法的技术方案，其成本较低、分离效率高、不用有毒溶剂，无环境污染。

所述的从含羞草中分离纯化黄酮苷单体的方法，其特征在于包括以下步骤：

1)原料处理：将含羞草全草粉碎成粗粉，过20～40目筛；

2)提取：将含羞草粗粉放入提取容器中，并将其置入超声波提取器中，在50～60℃的条件下每次用6～8倍量的40％～60％含水乙醇做溶剂超声提取2～3次，每次30～60min，抽滤，合并滤液；

3)减压浓缩：将步骤2)的滤液在水浴温度60℃以下真空薄膜浓缩至滤液无醇味，回收乙醇，得到浓缩液；

4)醇沉除杂：在步骤3)的浓缩液中加入等体积的乙醇，搅拌后放置过夜，析出多糖等水溶性杂质沉淀，抽滤，除去沉淀物，滤液备用；

5)减压浓缩：将步骤4)的滤液继续在60℃以下真空薄膜浓缩，得到浓缩液；

6)大孔树脂纯化：将步骤5)的浓缩液通过大孔吸附树脂分离富集，先用H₂O洗脱，再依次用10％～70％的含水乙醇进行梯度洗脱，洗脱流速为5～15mL·min^-1，分别收集3倍柱体积的各部位洗脱液，合并20～60％含水乙醇各部位的洗脱液，将合并的洗脱液在60℃以下真空浓缩成膏状物；

7)凝胶柱色谱分离：将步骤6)的膏状物通过凝胶柱色谱分离，先用H₂O洗脱，再依次用10％～70％的含水乙醇进行梯度洗脱，洗脱流速为3～5mL·min^-1，分别收集3倍柱体积的各部位洗脱液，合并30～50％含水乙醇各部位的洗脱液，将合并的洗脱液在60℃以下真空浓缩成膏状物；

8)硅胶柱色谱分离：将步骤7)的膏状物通过硅胶柱色谱分离，以体积比6∶2∶1～7∶2∶3的乙酸乙酯-乙醇-水进行梯度洗脱，分别收集洗脱液，通过TLC检识，合并相同流分，分别得到牡荆苷、荭草苷及异荭草苷单体。

所述的从含羞草中分离纯化黄酮苷单体的方法，其特征在于步骤2)中：超声提取的时间为40～50min。

所述的从含羞草中分离纯化黄酮苷单体的方法，其特征在于步骤6)中：依次用10％、20％、40％、60％、70％的含水乙醇进行梯度洗脱，洗脱流速为6～12mL·min^-1，优选8～10mL·min^-1。

所述的从含羞草中分离纯化黄酮苷单体的方法，其特征在于步骤6)中：所述的大孔吸附树脂为Diaion HP-20大孔吸附树脂，色谱柱的径高比为1∶10～15，优选1∶10～12