[发明专利]透明质酸酶抑制剂及其制备方法和应用

说明书

技术领域：

本发明涉及化学领域，具体地，涉及以1，2，3，4，6-五-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖为活性成分的透明质酸酶抑制剂或化妆品或保健品或药品，及其制备方法和其在制备透明质酸酶抑制剂或化妆品或保健品或药品中的应用。

背景技术：

1，2，3，4，6-五-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖(1，2，3，4，6-penta-O-galloyl-β-D-glucose，PGG)为水解单宁，由葡萄糖与5个没食子酸通过酯键相连形成的没食子酸单宁。药理研究表明，该化合物具有多方面的生理活性，如抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、拮抗内毒素/脂多糖、降糖祛脂等。但是，迄今为止没有关于对透明质酸酶抑制作用的报道。

透明质酸酶是透明质酸的特异性裂解酶，而透明质酸广泛地存在于动物的各种组织中，在机体内显示出多种重要的生理功能，如润滑关节、调节蛋白质的运转、促进创伤愈合等。更为重要的是，它具有良好的保湿作用，在保湿的同时，又是良好的透皮吸收促进剂。含透明质酸的化妆品目前在国际上被公认为“仿生化妆品”、“第四代化妆品”。透明质酸酶是I型过敏反应和肿瘤细胞增殖的参与者，它与炎症、过敏有强相关性。因此，抑制透明质酸酶的活性，既能使透明质酸不被分解以维持其正常的生理功能，又能达到抗炎、抗过敏、抗肿瘤的功效。另外，在含有透明质酸的制剂(特别地，如美容增强剂和组织填充剂)中加入透明质酸酶抑制剂，能够增强制剂作用的持久性，避免规律性地重复给药。所以，透明质酸酶抑制剂的开发在制药、保键品、化妆品行业具有重要意义。可以作为防止和改善炎症的药品或保键品。亦可作为抗过敏和抗炎的化妆品。此外，可作为含有透明质酸制剂的添加剂，增强制剂的稳定性、持久性和活性。

目前，已报道的透明质酸酶抑制剂根据其化学结构可分为蛋白质类、葡糖氨基聚糖类、多糖类、生物碱、萜类等。它们主要提取自蛇毒、动植物器官、微生物或经人工合成制得。但是，大批量制备所需成本较高。迄今，没有1，2，3，4，6-五-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖(PGG)对透明质酸酶活性的抑制作用的报道；目前，PGG主要从植物提取物中分离纯化，但此方法因为PGG为水溶性好的水解单宁，存在极性大，分离纯化过程繁琐，得率低等问题，迄今没有以单宁酸为原料，工业化批量生产PGG的制备工艺。

发明内容：

针对现有技术存在的上述问题，本发明的目的在于提供一种以1，2，3，4，6-五-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖(PGG)为活性成分的透明质酸酶抑制剂，提供一种成本低、得率高、纯度高、制备过程简单安全易行、生产周期短，易于批量制备和工业化生产1，2，3，4，6-五-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖(PGG)的制备方法及其作为透明质酸酶抑制剂的用途。

为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：

透明质酸酶抑制剂，含有1，2，3，4，6-五-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖。

所述的1，2，3，4，6-五-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖即PGG的制备方法，是以将单宁酸溶于含有pH＝6的HAc-NaAc缓冲溶液的90％的甲醇或乙醇溶液中，50℃水浴中密闭水解12小时，在48℃下减压蒸干，溶于甲醇或乙醇后经葡聚糖凝胶柱洗脱得PGG粗品；再经大孔吸附树脂分离纯化，用水、10％、20％、30％、40％甲醇或乙醇水溶液梯度洗脱，收集洗脱液，浓缩、干燥即可。

所述的原料为单宁酸，包括但不限于工业单宁酸，单宁酸，含单宁酸的提取物。

单宁酸质量(g)，HAc-NaAc缓冲溶液(mL)和甲醇或乙醇(mL)的比例为1∶1.5∶13.5。

用于检测和指导柱层析分离的薄层层析法是以7∶3∶0.5的氯仿-甲醇-水为展开剂，FeCl₃乙醇液为显色剂。

柱层析分离用的葡聚糖凝胶柱填充剂为葡聚糖凝胶，包括但不限于Sephadex G，Sephadex C-50，Sephadex LH-20；大孔吸附树脂填充剂为聚苯乙烯型的大孔吸附树脂，包括但不限于SEPABEADS SP825(SP850，SP70，SP207，SP700)、MCI gel CHP20P(75-150m)、Diaion HP20(HP20SS)、XAD-2、XAD-4、D-101、KB-8。

1，2，3，4，6-五-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖在制备透明质酸酶抑制剂中的应用。

1，2，3，4，6-五-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖在制备药物中的应用。

1，2，3，4，6-五-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖在制备化妆品中的应用。