[发明专利]一种永生化人肝细胞系及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及生物学领域，具体涉及一种永生化人肝细胞系及其制备方法和该永生化人肝细胞系在制备生物人工肝和制备治疗肝功能衰竭药物中的应用。

背景技术

肝移植是治疗终末期肝功能衰竭的唯一有效方法。但是，由于肝供体器官来源非常有限，大多数急性肝功能衰竭的病人往往在等待肝移植供体期间死亡。因此，建立一种生物人工肝支持系统，重建基本的肝脏功能是治疗急性肝功能衰竭的一种新技术，不仅可提高肝衰竭患者的生存率，而且为患者进行肝移植赢得时间。生物人工肝技术是利用具有部分或全部肝细胞活性的细胞装置在生物反应器中，通过该系统中的肝细胞将患者血浆中的毒性物质进行代谢，从而起到替代肝脏功能的效果。

生物人工肝中的核心部分是生物反应器。生物反应器一般由生物活性细胞和提供生物活性细胞生长及代谢环境的支持系统构成。生物反应器中使用的细胞性质和功能是决定生物人工肝功能效果的主要因素。目前生物反应器所使用的生物活性细胞主要是新鲜的猪肝细胞(Donato MT，Castell JV，Gomez-Lechon MJ. Characterization of drugmetabolizing activities in pig hepatocytes for use in bioartificial live

由于猪肝细胞的细胞色素P450含量及混合氧化酶活性与人肝细胞接近，且具备较好的代谢胆红素与清除血氨的功能，加之猪细胞来源广泛，价格低廉，因此被应用作为生物人工肝的细胞材料(Donato MT，Castell JV，Gomez-Lechon MJ. Characterization of drug metabolizing activities in pig hepatocytes for use in bioartificialliver de

另一种尝试用于生物人工肝的细胞材料是人肝肿瘤细胞，如低度恶性的肝癌细胞株，C3A细胞(Court FG，Wemyss-Holden SA，Dennison AR，Bioartificial liver supportdevices：historical perspectives.ANZ J Surg，2003 Sep；73(9)：739-48)。由于这种细胞存在致瘤性，生物安全性难以充分保证，并且细胞的生物活性较低，功能上难以令人满意，故至今未能在生物人工肝制备中广泛应用。

理想的生物人工肝细胞材料应该是人源性、表型正常(非恶性)、容易获得、具有正常肝细胞的解毒功能(Hoofnagle JH，Carithers RL Jr，Shapiro C，et al.Fulminanthepatic failure：summary of a workshop.Hepatology，1995；21(1)：240-252)。人的肝细胞就其生物学功能及免疫学特性而言无疑是为最理想的生物人工肝细胞材料。但由于其来源受到供肝缺乏的限制，而且在体外培养条件下很难增殖。因此，国内外技术人员试图利用永生化技术建立人源化肝细胞系来解决生物人工肝细胞材料的来源问题。但是，到目前为止，国内外所建立的几种永生化肝细胞系例如：OUMS29(Kobayashi N，Noguchi H，Fujiwara T，et al.Establishment of a highly differentiated immortalized adulthuman hepatoyte cell line by retroviral gene transfer.Transplant Pro.2000；32(7)：2368-2369)、HepZ(Werner A，Duvar S，Muthing J，et al.Cultivation andcharacterization of a new immortalized human hepatocyte cell line，HepZ，for use in anartificial liver support system.Ann N YAcad Sci，1999；875：364-368)等都表现出不同程度的肝细胞功能缺陷，因此还未见有人源化永生化化肝细胞系应用于生物人工肝制备的文献报道。