[发明专利]流感复合多表位DNA疫苗及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及流感疫苗，特别是涉及以流感病毒基因抗原表位为基础的DNA疫苗。

背景技术

流行性感冒(Influenza)简称流感，是由流感病毒(Influenza virus，IV)引起的急性呼吸道传染病。流感病毒在呼吸道上皮细胞内复制并引起表面炎症，表现为急性上呼吸道炎和全身中毒症状。20世纪30年代人类就开始了对流感病毒的认知及疫苗的开发，然而时至今日流感病毒依然是威胁人类和动物健康的重要病原。数年来，流感病毒的流行造成了巨大的人力资源和物力资源的损失。依据其内部蛋白抗原性的不同，流感病毒可分为A、B、C三个型。A型在广谱的温血动物中存在(禽类和哺乳动物)中存在，而B和C型主要是人类的病原，C型也可在猪上分离到。依据其表面抗原血凝素(Hemagglutinin，HA)和神经氨酸酶(Neuraminidase，NA)不同，又可分为若干不同的亚型。其中，A型流感病毒是对人和禽危害最为严重的流感类型。其某些亚型变异迅速，致病力强，曾造成过多次世界性大流行，在造成巨大经济损失的同时，还会造成人和禽的大量死亡。

数年来，人流感的流行一直以A型H3、H1亚型，以及B型流感为主。据世卫组织(WHO)发布的公告，全球每年流感病例为6亿～12亿例，死亡50万～100万人，其中重症流感病例300万～500万例，重症流感的病死率为8％～10％。在美国每年因流感造成的经济损失就达30～50亿美元。20世纪中流感造成了四次全球性大流行，包括1918～1919年的西班牙流感(H1N1)，1957年的亚洲流感(H2N2)，1968年的中国香港流感(H3N2)和1977年的俄国流感(H1N1)，给人类带来了灾难性的损失。仅1919年西班牙大流感就夺去了2100万条生命，超过第一次世界大战死亡人数，而全球感染人数达到6亿，而其它几次大流行造成的人类死亡数量也数以百万计。

禽流感(Avian influenza，AI)病原为A型流感病毒，血清型以H5、H7、H9亚型为主。目前，禽流感广泛分布于世界范围内的许多家禽和野禽中，自迁徙水禽分离到的病毒较多，而对鸡和火鸡的危害则最为严重。其中，高致病力禽流感(HPAI)对禽类危害最为严重，其主要血清型为H5和H7亚型。HPAI常以突然死亡和高死亡率为主要特征，常常导致感染鸡群的全群覆没，已经给养禽业带来巨大的经济损失，被国际兽疫局列为A类烈性传染病，同时被列入国际生物武器公约动物类传染病名单。一直以来，人们普遍认为高致病性禽流感的发生比较罕见，因为在1959-1998年的40年间，世界范围内一共只报道了17次HPAI。但自1999年开始，HPAI的爆发变的非常频繁，1997-2004的七年中就发生了8次HPAI，而且涉及的范围更加广泛，尤其是2004年禽流感的爆发最为严重。距不完全统计，亚洲各国死亡或淘汰的禽只总数近1亿只，超过历史数次HPAI感染/淘汰禽数的总量。在其数次流行的过程中，更发生了数起HPAI感染人类并造成死亡的病例，引起了民众的极大恐慌。禽流感尤其是HPAI展示向人流感进化的趋势，这令环境中流感的流行情况变得更为复杂，并可能再次引发流感大流行。

由于尚缺乏可有效治疗流感的药物，疫苗的使用依然是阻止流感感染和传播的有效手段。当前，人流感和禽流感的预防主要依赖于灭活疫苗以及减毒活疫苗，长期的使用经历证明它们是安全有效的，并发挥了巨大的作用。但是，灭活疫苗和弱毒疫苗，都存在着一些自身无法避免的缺陷。灭活疫苗存在着激发的细胞免疫水平低下，仅能对抗原相配病毒株产生免疫保护，佐剂添加引起的应激反应，生产成本偏高，感染免疫监测等不足。而减毒活疫苗则有突变为高致病性流感的可能。且这两种疫苗均无法有效应对现在流感病毒变异迅速、多亚型流感并存流行、种属界限日益模糊的趋势。开发高效、安全的流感疫苗一直是各国研究的焦点。

随着生物技术领域的飞速发展，以疫苗等生物制品为中心的生物技术研究已成为全球进步最快的领域之一。基因工程技术的不断应用，新型佐剂的涌现，更是加速了疫苗研发的脚步。不断研究更为安全有效的禽流感疫苗，克服传统疫苗的诸多缺陷，更好的防控禽流感，成为科研人员关注的焦点。目前流感疫苗主要分为以下几种。

灭活全病毒疫苗