[发明专利]一种戊型肝炎感染模型的构建方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种戊型肝炎感染模型的构建方法，特别涉及一种戊型肝炎长爪沙鼠感染模型的构建方法。

背景技术

目前为止，在戊型肝炎的研究中，还缺少成功培养戊型肝炎病毒(HEV)的细胞系，HEV研究主要还是依赖试验动物。灵长类动物如猕猴、黑猩猩等模型的应用，使HEV研究在病毒复制位点、排毒和病毒血症持续时间、抗体消长规律、基因型、亚型致病性差异和越种传播机机制等方面已经取得了很大的进步。然而，灵长类动物存在价格昂贵、来源有限、实验条件要求高、难以大批量使用等缺点。长期以来，各国科学家都尝试建立一种啮齿动物感染模型，但一直未获得成功。

目前使用的非人灵长类动物感染模型价格昂贵、来源有限、实验要求条件高、繁殖周期长、试验操作复杂、饲养不方便，使其应用受到极大的限制。

发明内容

本发明的目的是提供一种戊型肝炎感染模型的构建方法。

本发明所提供的戊型肝炎感染模型的构建方法，是用戊型肝炎病毒攻毒长爪沙鼠，得到感染戊型肝炎的模型。

所述攻毒方法为口服。

所述攻毒的剂量为10⁵-10⁸病毒拷贝(基因组剂量，Genomic doses)，以10⁶病毒拷贝为最佳感染剂量。

所述攻毒用病毒为基因4型戊型肝炎病毒。

本发明用基因4型HEV毒株建立长爪沙鼠试验感染模型，并从比较病理学的角度，证实HEV感染沙鼠组织病理学病变与人、猪感染HEV相似，建立HEV感染的长爪沙鼠模型。长爪沙鼠感染模型具有试验操作简便易行，饲养管理方便。尤其是价格低廉，1只长爪沙鼠仅仅是一只灵长类动物费用的千分之一至四百分之一。因此，用长爪沙鼠作为HEV感染模型，所取得的研究结果将更加系统、全面、可靠，更具有说服力。

实验证明，用本发明的方法构建戊型肝炎感染模型，感染后1周可出现病毒血症，血液、粪便中HEV可持续4周左右；肝脏中持续7周以上；小肠中也能检测到HEV RNA。HEV免疫组织化学检测可发现感染组沙鼠的肝组织中成片的肝细胞呈HEV免疫组化阳性反应，小肠、肾脏、肾上腺、睾丸等组织中也可见有明显的阳性信号。临床观察试验鼠未见明显异常表现，组织病理学观察发现肝脏有淤血，肝细胞普遍见有程度不同的变性，肝小叶汇管区或肝细胞间淋巴细胞局灶状浸润等病变。肠道、肾脏、心肌、睾丸等组织也见有明显的组织病理学变化。

本发明的方法价格低廉，使用饲养、试验操作方便的长爪沙鼠感染模型，避免了目前使用的非人灵长类动物价格昂贵、来源有限、实验要求条件高、繁殖周期长等不足。为HEV致病机理、疫苗研制、越种传播机制等研究提供了一种理想的感染模型。

附图说明

图1为HEV感染长爪沙鼠的粪便、血清样品中HEV RT-PCR检测电泳结果

图2为HEV攻毒沙鼠的组织病理学及肝脏、肠道中HEV抗原免疫组化定位结果的照片

具体实施方式

下面结合具体实例对本发明做详细说明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。

下述百分含量如无特别说明，均为质量百分含量。

实施例1、戊型肝炎感染模型的构建及其效果验证

1、戊型肝炎感染模型的构建

(1)试验长爪沙鼠(购自首都医科大学实验动物科学部)：选用SPF级或清洁级，50-80g长爪沙鼠。经抗体检测后，选择HEV IgG阴性鼠，选出28只平均分为两组，每组14只，隔离系统单独饲养。

(2)攻毒：选择HEV基因4型病毒(其基因组的序列为GENBANK中编号为FJ409465所示的序列)拷贝数在10⁵以上的猪肝脏病料，制备肝脏悬液，每只长爪沙鼠经口腔灌服10⁵-10⁸个病毒拷贝(基因组剂量)，以10⁶个病毒拷贝为最佳感染剂量，本实施例中，每毫升悬液中HEV含量为10⁶个拷贝时，灌服1毫升上述肝脏悬液。对照组灌服1毫升生理盐水。

2、戊型肝炎感染模型的构建效果验证

(1)样品收集：将步骤1攻毒后戊型肝炎长爪沙鼠感染模型和对照组沙鼠粪便样品每天收集一次；血液样品每周采集一次，眼眶采血，分离血清；粪便和血清于-70℃保存备用。每周各组处死2只沙鼠，剖检、观察各器官、组织的病变情况，采集二份心、肝、脾、肺、肾、淋巴结、小肠样品，一份-70℃冻存用于HEV RNA检测；另一份用2.5％戊二醛-多聚甲醛混合固定液固定用于组织病理学观察和免疫组化定位。