[发明专利]一种脂肪酶键合固定相及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种脂肪酶键合固定相的制备方法，其特征在于，所述脂肪酶键合固定相由表面带有醛基的球形硅胶填料与脂肪酶的氨基以亚胺键直接键合，而后把亚胺还原为氨基制得，其具体制备步骤为：

1)环氧基硅胶的制备：在100mL三口瓶中加入3.0g球形硅胶和50mL 10％的盐酸溶液，加热回流12～14h后，停止加热，抽滤，用蒸馏水洗涤至中性，60℃真空干燥12h，将干燥好的硅胶置于100mL三口瓶中，然后加入5～8mL 3-缩水甘油丙氧基三甲氧基硅烷和50mL无水甲苯，氮气保护下于110℃回流搅拌反应12～14h，然后停止加热，抽滤，依次用甲苯，甲醇，丙酮和正己烷洗净，60℃真空干燥12h；

2)二醇基硅胶的制备：将上述步骤1)中制备的环氧基硅胶置于500mL三口瓶中，然后加入300mL、pH＝3～4的硫酸溶液回流搅拌反应1.5h，然后停止加热，抽滤，用蒸馏水洗涤至中性，室温下真空干燥12h；

3)醛基硅胶的制备：将上述步骤2)中制备的二醇基硅胶置于100mL三口瓶中，然后加入60mL 90％的醋酸水溶液和2～3g高碘酸钠搅拌反应2h，抽滤，用蒸馏水洗净；

4)脂肪酶键合固定相的制备：称取南极假丝酵母脂肪酶B 150～600mg，置于250mL三口瓶中，加入100mL、pH＝5～6的0.1mol/L醋酸盐缓冲液，搅拌溶解，加入上述步骤3)中制备的醛基硅胶3g和75mg氰基硼氢化钠，于0～4℃搅拌反应3～5天，抽滤，用pH＝8的0.1mol/L磷酸盐缓冲液洗净；所得固定相在100mL pH＝8的0.1mol/L磷酸盐缓冲液中，在2～3h内分3次共加入硼氢化钠75mg，每次25mg，以还原硅胶表面剩余的醛基，抽滤，用pH＝8的0.1mol/L磷酸盐缓冲液洗净，得到所需脂肪酶键合固定相。

2.根据权利要求1所述的脂肪酶键合固定相的制备方法，其特征在于，所述球形硅胶的粒径为5～30微米，孔径为200～4000埃。

3.根据权利要求1所述的脂肪酶键合固定相的制备方法，其特征在于，所述球形硅胶由日本富士公司购得；所述南极假丝酵母脂肪酶B由荷兰Chiralvision公司购得。

4.权利要求1所述方法制备的脂肪酶键合固定相的用途，其特征在于，用作手性色谱柱及在线液相色谱反应器填料。

5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述手性色谱柱填料用作分离手性化合物。

6.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述手性色谱柱填料用作分离1-萘乙醇、2-萘乙醇、1-萘丙醇、2-萘丙醇或烯唑醇。

7.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述在线液相色谱反应器填料用作催化手性仲醇酯和3-氯-1-(2-噻吩)丙醇丁酸酯的不对称水解。