[发明专利]甲基化DNA的浓缩方法和检测方法以及试剂盒

权利要求书

1.一种甲基化DNA的浓缩方法，该方法包括将生物样品直接与固相化的甲基化DNA结合蛋白和/或其结构域蛋白接触，编码所述甲基化DNA结合蛋白的基因序列如SEQ ID NO：1所示，编码所述甲基化DNA结合蛋白的结构域蛋白的基因序列如SEQ ID NO：2所示。

2.根据权利要求1所述的浓缩方法，其特征在于，所述固相化的甲基化DNA结合蛋白和/或其结构域蛋白的固相化载体选自凝胶颗粒、磁珠、树脂和膜系统中的一种或多种。

3.根据权利要求1或2所述的浓缩方法，其特征在于，所述浓缩方法还包括生物样品预处理的步骤，例如将生物样品进行蛋白变性预处理。

4.一种用于浓缩甲基化DNA的试剂盒，该试剂盒包括固相化的甲基化DNA结合蛋白和/或其结构域蛋白，编码所述甲基化DNA结合蛋白的基因序列如SEQ ID NO：1所示，编码所述甲基化DNA结合蛋白的结构域蛋白的基因序列如SEQ ID NO：2所示。

5.一种甲基化DNA的检测方法，该方法包括以下步骤：

(1)浓缩：将生物样品直接与固相化的甲基化DNA结合蛋白和/或其结构域蛋白接触，编码所述甲基化DNA结合蛋白的基因序列如SEQ ID NO：1所示，编码所述甲基化DNA结合蛋白的结构域蛋白的基因序列如SEQ IDNO：2所示；

(2)转化：使用重硫酸盐处理步骤(1)浓缩到的甲基化DNA；

(3)脱硫：使用碱性脱硫剂处理步骤(2)得到的经转化的甲基化DNA；以及

(4)测定步骤(3)得到的DNA序列。

6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述固相化的甲基化DNA结合蛋白和/或其结构域蛋白的固相化载体选自凝胶颗粒、磁珠、树脂和膜系统中的一种或多种。

7.根据权利要求5或6所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(4)中的测定方法选自PCR分析、基因序列分析和分子杂交分析中的一种或多种。

8.根据权利要求5至7中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述生物样品选自血清、血浆、尿、痰、细胞提取物、组织提取物和粪便提取物中的一种或多种。

9.根据权利要求5至8中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法还包括生物样品预处理的步骤，例如将生物样品进行蛋白变性预处理。

10.一种用于检测甲基化DNA的试剂盒，该试剂盒包括固相化的甲基化DNA结合蛋白和/或其结构域蛋白，编码所述甲基化DNA结合蛋白的基因序列如SEQ ID NO：1所示，编码所述甲基化DNA结合蛋白的结构域蛋白的基因序列如SEQ ID NO：2所示。

11.根据权利要求10所述的试剂盒，其特征在于，所述固相化的甲基化DNA结合蛋白和/或其结构域蛋白的固相化载体选自凝胶颗粒、磁珠、树脂和膜系统中一种或多种。

12.根据权利要求10或11所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括用于转化甲基化DNA的重硫酸盐、用于脱硫的碱性脱硫剂和转化后的DNA回收溶液。