[发明专利]流感病毒RT-PCR检测引物及检测流感病毒的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种RT-PCR检测技术，尤其涉及一种流感病毒RT-PCR检测引物及检测流感病毒的方法。

背景技术

流感病毒基因组由8条负链RNA节段构成。根据核蛋白(NP)和基质蛋白(M)不同分为A型、B型、C型。A型流感病毒根据表面血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的不同分为16个HA亚型和9个NA亚型；B型和C型流感病毒不分亚型。A型常引起世界性大流行；B型、C型则以局部暴发和散发流行为特征。

2009年3月，墨西哥和美国先后发现了甲型H1N1流感病毒感染病例，至2009年5月21日，已经有42个国家出现甲型H1N1流感确诊病例，全球确诊病例超过1万，感染人数呈不断上升趋势。目前的数据显示，该病毒已经具备了人际传播的能力，人群对该病毒的免疫低下，因此病毒在人际之间的传播能力较普通流感病毒强。

甲型H1N1流感潜伏期一般1至7天，早期症状与普通流感相似，包括发热、咳嗽、喉痛、身体疼痛、头痛、发冷和疲劳等，有些还会出现腹泻或呕吐、肌肉痛或疲倦、眼睛发红等。部分患者病情来势凶猛、突然高热、体温超过39℃，甚至继发严重肺炎、急性呼吸窘迫综合征、肺出血、休克及Reye综合征、呼吸衰竭及多器官损伤，最后导致死亡。甲型流感H1N1亚型病毒的基因核酸序列与季节性流感病毒H1N1接近，病原的诊断需要采用较为复杂和繁琐的基因序列测定，难以在普通实验室进行。

现有技术中，采用的流感病毒检测方法为鸡胚病毒分离培养方法，灵敏度高。

上述现有技术至少存在以下缺点：

操作费时、需3周时间，而且对实验室的要求也比较高。

发明内容

本发明的目的是提供一种操作简单、应用方便的流感病毒RT-PCR检测引物及检测流感病毒的方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

本发明的流感病毒RT-PCR检测引物，包括以下一种或多种引物：

甲型流感病毒通用性引物、甲型H1N1流感病毒H1通用性引物、新甲型H1N1流感病毒H1特异性引物；

所述甲型流感病毒通用性引物针对甲型流感病毒M基因相对保守区；

所述甲型H1N1流感病毒H1通用性引物针对甲型H1N1流感病毒HA基因相对保守区；

所述新甲型H1N1流感病毒H1特异性引物针对新甲型H1N1流感病毒HA基因相对保守区。

本发明的应用上述的流感病毒RT-PCR检测引物检测流感病毒的方法，其特征在于，包括步骤：

首先，利用核酸提取试剂从待测样本中提取流感病毒RNA；

然后，利用一步法RT-PCR试剂盒加入所述引物进行核酸扩增；

之后，利用RT-PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，根据特异性条带的大小判断待检样本流感病毒是否阳性。

由上述本发明提供的技术方案可以看出，本发明所述的流感病毒RT-PCR检测引物及检测流感病毒的方法，由于包括针对甲型流感病毒M基因、甲型H1N1流感病毒HA基因或新甲型H1N1流感病毒HA基因相对保守区的引物。可以通过RT-PCR法检测流感病毒，操作简单、应用方便。

具体实施方式

本发明的甲型流感病毒RT-PCR检测引物，其较佳的具体实施方式是，包括以下一种或多种引物：

甲型流感病毒通用性引物、甲型H1N1流感病毒H1通用性引物、新甲型H1N1流感病毒H1特异性引物；

所述甲型流感病毒通用性引物针对甲型流感病毒M基因相对保守区；

所述甲型H1N1流感病毒H1通用性引物针对甲型H1N1流感病毒HA基因相对保守区；

所述新甲型H1N1流感病毒H1特异性引物针对新甲型H1N1流感病毒HA基因相对保守区。

所述引物包括长度为20～26bp的寡核苷酸片段。

所述甲型流感病毒通用性引物包括以下两条序列：

5’-TTCTAACCGAGGTCGAAACG-3’；5’-ACAAAGCGTCTACGCTGCAG-3’；

所述甲型H1N1流感病毒H1通用性引物包括以下两条序列：

5’-AAGAGCACACATAATGCCAT-3’；5’-CCATTRGARCACATCCAG-3’；

所述新甲型H1N1流感病毒H1特异性引物包括以下两条序列：

5’-AATAACATTAGAAGCAACTGG-3’；5’-AGGCTGGTGTTTATRGCACC-3’。

每种所述引物的两条序列中，其中一条与病毒基因正向序列互补；另一条与病毒基因反向序列互补。