[发明专利]一种鉴定小麦低分子量谷蛋白亚基等位变异的质谱方法

权利要求书

1、一种鉴定低分子量谷蛋白亚基等位变异的质谱方法，是用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对低分子量谷蛋白亚基进行鉴定，根据其蛋白特征峰，确定低分子量谷蛋白亚基的等位变异。

2、根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述低分子量谷蛋白亚基的制备方法包括以下步骤：

(1)用体积百分含量为30-70％乙醇溶液除去小麦中的醇溶蛋白，取沉淀；

(2)在上述步骤(1)获得的沉淀中加入异丙醇溶液，60-70℃温浴40-60min，取沉淀；

(3)在上述步骤(2)获得的沉淀中加入溶液A，30-50℃温浴50-60min；

所述溶液A由异丙醇、DTT、Tris-HCl和水组成；

所述溶液A中，异丙醇的体积百分含量为50％，DTT的体积百分含量为1％，Tris-HCl的pH为8.0，Tris-HCl终浓度为80mM；

(4)在上述步骤(3)的溶液中加入溶液B，50-60℃温浴30-40min，取上清；

所述溶液B由异丙醇、4-乙烯基吡啶、Tris-HCl和水组成；

所述溶液B中，异丙醇的体积百分含量为50％，4-VP的体积百分含量为1.4％，Tris-HCl的pH为8.0，Tris-HCl的终浓度为80mM；

(5)在上述步骤(4)获得的上清中加入丙酮溶液，取沉淀，得到小麦低分子量谷蛋白亚基。

3、根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)中，所述乙醇溶液为体积百分含量为70％的乙醇水溶液。

4、根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，所述异丙醇溶液为体积百分含量为55％的异丙醇水溶液。

5、根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤(5)中，所述丙酮溶液为体积百分含量为80％的丙酮水溶液。

6、根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，温浴的条件为65℃温浴50min；所述步骤(3)中，温浴的条件为40℃温浴55min；所述步骤(4)中，温浴的条件为55℃温浴35min。

7、根据权利要求2-6中任一所述的方法，其特征在于：所述低分子量谷蛋白亚基上样前还进行预处理；

所述预处理是将低分子量谷蛋白亚基溶于溶液C中；

所述溶液C由乙腈、TFA和水组成；

所述溶液C中，乙腈的体积百分含量为50％，TFA的体积百分含量为0.05％。

8、根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述低分子量谷蛋白亚基的上样包括以下步骤：

将芥子酸溶液滴加到靶板的样品孔内，待芥子酸溶液干燥后，在样品孔内再滴加预处理过的低分子量谷蛋白亚基溶液，待低分子量谷蛋白亚基溶液干燥后，再在样品孔内滴加芥子酸溶液；

所述芥子酸溶液是将芥子酸溶解于溶液C中得到的；

所述溶液C由乙腈、TFA和水组成；

所述溶液C中，乙腈的体积百分含量为50％，TFA的体积百分含量为0.05％；

所述芥子酸溶液中，芥子酸的浓度为10mg/ml。

9、根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪的参数设置如下：

(1)加速电压：25kV；

(2)导丝电压：0.15％；

(3)电网电压：94％；

(4)延迟时间：950ns；

(5)激光功率：1900-2400(step 100)；

(6)分子量范围：10-50kDa；

(7)Low mass gate：10kDa；

(8)Digitizer Binsize：4nsec；

(9)输入带宽：250MHz；

(10)50laser shots/Mass spectra，自动积累随机模式。

10、根据权利要求1-9中任一所述的方法，其特征在于：所述低分子量谷蛋白亚基等位变异的位点为低分子量谷蛋白亚基的Glu-3位点。