[发明专利]一种具有降血脂作用的辛伐他汀组合物及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种组合物，特别涉及一种具有降血脂作用的辛伐他汀组合物及其制备方法。

背景技术

辛伐他汀为一种高效调脂药，能使血浆总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、甘油三酯下降、高密度脂蛋白胆固醇升高。能显著减缓动脉粥样硬化进程，有出色的耐受性、高度的安全性。用于高脂血症、家族性高胆固醇血症。

发明内容

本发明的一个目的在于公开一种辛伐他汀组合物；本发明的另一个目的在于公开一种具有降血脂作用的辛伐他汀组合物的制备方法。

本发明目的是通过如下技术方案实现的：

本发明辛伐他汀组合物由如下固体发酵方法制备：

斜面菌种培养：选曲霉CICC 2368进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph 6-8的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0.02-0.1重量份；在100-120℃条件下灭菌，灭菌后冷却，常规方法制得斜面并接种，在20℃-40℃条件下培养3-7天，作为斜面菌种；固体发酵培养：将麸皮与麦芽汁按照重量体积比为1∶0.5-2的比例混和，混匀后在100-120℃条件下，灭菌20-40分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基体积的5-10％，在20-40℃，培养1-5天，在培养好的麸皮中加入0.01-0.5M ph7 pbs缓冲液浸泡过夜，得固体发酵培养液；粗酶液的制备：固体发酵培养液中加入硫酸铵至饱和，搅拌均匀至完全溶解，在4℃条件下放置过夜，离心取沉淀，透析，离心取上清液作为粗酶液；底物的制备：用水溶液溶解辛伐他汀，制成的溶液每体积份含辛伐他汀0.03-0.2重量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶转化反应：将粗酶液与底物以体积比为1∶1.5-8混合，在转化温度为20-40℃，转化反应时间为12-48小时，即得组合物。

本发明辛伐他汀的组合物固体发酵方法优选为：

斜面菌种培养：选曲霉CICC 2368进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph是7的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0.05重量份；在110℃条件下灭菌，灭菌后冷却，制得斜面并接种，在30℃条件下培养5天，作为斜面菌种；固体发酵培养：将麸皮与麦芽汁按照重量体积比为1∶1的比例混和，混匀后在110℃条件下，灭菌30分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基的8％，在30℃，培养3天，在培养好的麸皮中加入0.3M ph7 pbs缓冲液浸泡过夜，得固体发酵培养液；粗酶液的制备：固体发酵培养液中加入硫酸铵至饱和，搅拌均匀至完全溶解，在4℃条件下放置过夜，离心取沉淀，透析，离心取上清液作为粗酶液；底物的制备：用水溶液溶解辛伐他汀，制成的溶液每体积份含辛伐他汀0.1重量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶转化反应：将粗酶液与底物以体积比为1∶4混合，在转化温度为30℃，转化反应时间为24小时，即得组合物。

本发明辛伐他汀组合物还可以由如下液体发酵方法制备：

斜面菌种培养：选曲霉CICC 2368进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph是6-8的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0.02-0.1重量份；在100-120℃条件下灭菌，灭菌后冷却，制得斜面并接种，在20℃--40℃条件下培养3-7天，作为斜面菌种；液体发酵：将葡萄糖，牛肉膏，蛋白胨，硝酸铵，硫酸镁加入水中制得pH为6-8的培养基，使得每体积份培养基含葡萄糖0.01-0.1重量份，牛肉膏0.01-0.1重量份，蛋白胨0.01-0.06重量份，硝酸铵0.01-0.05重量份，硫酸镁0.01-0.08重量份；20-100体积份的培养基，在100-120℃条件下，灭菌20-40分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基的5-10％，在20-40℃，转速100-250r/min条件下进行发酵，培养1-5天，作为液体发酵培养液；底物的制备：用水溶液溶解辛伐他汀，制成的溶液每体积份含辛伐他汀0.03-0.2重量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶反应：利用液体发酵培养液作为酶源，将底物添加到液体发酵培养液中，至每体积份发酵培养液中含底物0.00003-0.0001重量份，在转化温度为20-40℃，转化时间为5-48小时，即得组合物。

本发明辛伐他汀组合物液体发酵方法优选为：