[发明专利]一种检测传染病病原体的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种非疾病诊断或治疗目的的对可能存在于生物样品中的传染 病病原体进行检测的方法，包括：

（ⅰ）扩增生物样品的核酸片段，所述核酸片段为鹦鹉热衣原体内 涵体膜蛋白A基因的如SEQ ID NO.1所示的核酸片段或其与以下各种核 酸片段的组合：

卡氏肺囊虫的主要表面糖蛋白基因的如SEQ ID NO.2所示的核酸片 段；

钩端螺旋体促旋酶B亚单位基因的如SEQ ID NO.3所示的核酸片段；

Q热立克次体外膜蛋白基因的如SEQ ID NO.4所示的核酸片段；

布鲁氏杆菌外膜蛋白omp2b基因的如SEQ ID NO.5所示的核酸片 段；

（ⅱ）用探针进行检测，所述探针与步骤（ⅰ）扩增产物中的一种特 异性杂交；

所述步骤（ⅰ）使用第1组引物用于扩增如SEQ ID NO.1所示的核 酸片段，其上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示，其下游引物核苷 酸序列如SEQ ID NO.7所示或其与以下各组的组合作为引物进行扩增：

第2组引物用于扩增如SEQ ID NO.2所示的核酸片段，其上游引物 核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，其下游引物核苷酸序列如SEQ ID  NO.10所示；

第3组引物用于扩增如SEQ ID NO.3所示的核酸片段，其上游引物 核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示，其下游引物核苷酸序列如SEQ ID  NO.13所示；

第4组引物用于扩增如SEQ ID NO.4所示的核酸片段，其上游引物 核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示，下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.16 所示；

第5组引物用于扩增如SEQ ID NO.5所示的核酸片段，其上游引物核 苷酸序列如SEQ ID NO.18所示，下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.19 所示；

所述步骤（ⅰ）利用NASBA技术扩增样品的核酸片段，NASBA运 行条件为41℃～45℃温育90～150分钟；

步骤（ⅱ）中所述探针与步骤（ⅰ）所得扩增产物的杂交在固体支 持物上进行；

所述步骤（ⅱ）使用捕获探针，其核苷酸序列如SEQ ID NO.21所示， 所述捕获探针直接或间接的连接在固体支持物上；

步骤（ⅱ）中使用以下的核苷酸序列作为检测探针：

如SEQ ID NO.8所示，检测如SEQ ID NO.1所示的核酸片段；

如SEQ ID NO.11所示，检测如SEQ ID NO.2所示的核酸片段；

如SEQ ID NO.14所示，检测如SEQ ID NO.3所示的核酸片段；

如SEQ ID NO.17所示，检测如SEQ ID NO.4所示的核酸片段；

如SEQ ID NO.20所示，检测如SEQ ID NO.5所示的核酸片段。

2.一种对可能存在于生物样品中的传染病病原体进行检测的试剂 盒，其包含用于扩增如SEQ ID NO.1所示的核酸片段的引物或其与用于 扩增如SEQ ID NO.2所示核酸片段的引物、用于扩增如SEQ ID NO.3所 示核酸片段的引物、用于扩增如SEQ ID NO.4所示核酸片段的引物和用 于扩增如SEQ ID NO.5所示核酸片段的引物中的一组或一组以上的组 合；

所述引物选自：

第1组引物用于扩增如SEQ ID NO.1所示的核酸片段，其上游引物 核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示，其下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.7 所示；

第2组引物用于扩增如SEQ ID NO.2所示的核酸片段，其上游引物 核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，其下游引物核苷酸序列如SEQ ID  NO.10所示；

第3组引物用于扩增如SEQ ID NO.3所示的核酸片段，其上游引物 核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示，其下游引物核苷酸序列如SEQ ID  NO.13所示；

第4组引物用于扩增如SEQ ID NO.4所示的核酸片段，其上游引物 核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示，下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.16 所示；

第5组引物用于扩增如SEQ ID NO.5所示的核酸片段，其上游引物 核苷酸序列如SEQ ID NO.18所示，下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.19 所示；

还包含如核苷酸序列SEQ ID NO.21所示的捕获探针；

还包含以下至少一种与引物对应的检测探针：

如SEQ ID NO.8所示，检测如SEQ ID NO.1所示的核酸片段；

如SEQ ID NO.11所示，检测如SEQ ID NO.2所示的核酸片段；

如SEQ ID NO.14所示，检测如SEQ ID NO.3所示的核酸片段；

如SEQ ID NO.17所示，检测如SEQ ID NO.4所示的核酸片段；

如SEQ ID NO.20所示，检测如SEQ ID NO.5所示的核酸片段。