[发明专利]表达非淀粉多糖复合酶的重组巴氏毕赤酵母菌及其应用

权利要求书

1.重组菌，是含有木聚糖酶基因、纤维素酶基因和β-甘露聚糖酶基因的重组巴氏毕赤酵母菌；

所述木聚糖酶基因的编码序列是Genbank号为AJ292317的5′端第1-576位的核苷酸序列；所述纤维素酶基因的核苷酸序列是Genbank号为EU022559的5′端第88-1500位的核苷酸序列；所述β-甘露聚糖酶基因的核苷酸序列是Genbank号为AY623903的5′端第122-1051位的核苷酸序列；

所述巴氏毕赤酵母菌为巴氏毕赤酵母菌GS115。

2.如权利要求1所述的重组巴氏毕赤酵母菌，其特征在于：所述木聚糖酶基因通过重组表达载体a导入巴氏毕赤酵母菌中，构成重组巴氏毕赤酵母菌A；所述重组表达载体a是将所述木聚糖酶基因插入到表达载体pPIC9上得到的表达木聚糖酶的重组表达载体。

3.如权利要求2所述的重组巴氏毕赤酵母菌，其特征在于：所述纤维素酶基因通过重组表达载体b导入重组巴氏毕赤酵母菌A中，构成重组巴氏毕赤酵母菌B；所述重组表达载体b是将所述纤维素酶基因插入到表达载体pPIC9K上得到的表达纤维素酶的重组表达载体。

4.如权利要求3所述的重组巴氏毕赤酵母菌，其特征在于：所述β-甘露聚糖酶基因通过重组表达载体c导入所述重组巴氏毕赤酵母菌B中得到权利要求1所述的重组菌；所述重组表达载体c是将所述β-甘露聚糖酶基因连接到表达载体pPICZαA上得到的表达β-甘露聚糖酶的重组表达载体。

5.如权利要求1-4中任意一项所述的重组巴氏毕赤酵母菌，其特征在于：所述重组菌为巴氏毕赤酵母(Pichia pastoris)CGMCC№.3025。

6.权利要求1-5中任意一项所述的重组巴氏毕赤酵母菌在生产非淀粉多糖复合酶中的应用。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于：所述应用是将权利要求1-5中任意一项所述的重组巴氏毕赤酵母菌，在温度28-30℃，pH5.0-6.0，溶氧为30％-60％，进行诱导发酵，表达出非淀粉多糖复合酶；所述培养用培养基为YPD培养基或BMGY培养基；所述BMGY培养基含有如下终浓度的物质：质量百分浓度为1％的酵母提取物，质量百分浓度为2％的蛋白胨，100mmol/L pH6.0磷酸缓冲液，质量百分浓度为1.34％的YNB，质量百分浓度为0.00004％生物素，和体积百分比1％的甘油的培养基；所述YPD培养基含有如下终浓度的物质：质量百分浓度为1％酵母提取物，质量百分浓度为2%的蛋白胨，质量百分浓度为2%的葡萄糖的培养基；所述重组菌在YPD培养基中培养30-60小时。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述重组菌在YPD培养基中培养48小时。

9.权利要求1-5中任意一项所述的重组巴氏毕赤酵母菌在生产饲料中的应用。