[发明专利]一种检测布鲁菌的基因液相芯片及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测布鲁菌(Brucella spp.，Bru)的基因液相芯片及其 制备方法。本发明还涉及利用所述的基因液相芯片进行检测的方法。

背景技术

液相芯片检测是近几年发展起来的新兴技术，具有快速、特异、敏 感的特点。悬浮芯片的基本原理是利用聚苯乙烯(polystyrene)所制作的 微球，包覆不同比例的红光及红外光发色剂，而产生100种不同比例颜 色，作为100种独特的色彩编号，每颗微球大小约5.5μm，可依不同研究 目的如免疫分析、核酸研究、酶分析、受体和配体识别分析等，并根据 不同研究目的而标定特定抗体、核酸探针及各种受体探针。

布鲁菌是布鲁菌病(brucellosic)的病原体，可感染人类、多种家畜和 野生动物，引起相似的临床症状与病理损伤，如发热、流产与不育、慢 性关节炎及神经损害等，而且引起的人类波状热、慢性感染至今无法根 治。因此，布病不仅损害人类健康，还影响着包括乳、肉及其制品、皮、 毛等在内的民生需求，导致巨大的经济损失和严重的公共卫生问题，是 传统的生物战剂之一。

布鲁菌病的诊断除通过直接涂片染色镜检、分离培养外，也有免疫 学方法如iELISA、cELISA等。近年来，布鲁菌分子生物学检测方法如 PCR、实时荧光PCR也飞速发展。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测布鲁菌的基因液相芯片，该基因液相 芯片可以用于病原体布鲁菌的检测。本发明还提供利用所述的基因液相 芯片进行检测的方法。

经过深入和大量的研究和实验，本发明以布鲁菌BCSP31基因特异序 列为靶序列，建立了布鲁菌的基因液相芯片和检测方法，为该菌的检测 提供一条可行的途径。

本发明所述的基因液相芯片包括：荧光编码的微球、捕获探针、引 物、PCR反应体系、链亲和素一藻红蛋白。

本发明的PCR反应体系包括：10×PCR缓冲液、dNTPs、Taq DNA聚 合酶。

本发明的引物包括：

其中，下游引物是5’生物素标记的Bru-R，具体例如是Ft-R：5’-生物 素-GCGCTTGCCTTTCAGGTCTG

本发明的捕获探针，所述的捕获探针具有特异性：

  探针   名称   探针靶位   探针序列(5’-3’)   Bru   布鲁菌BCSP37基因的   842-864bp   TTACGCAGTCAGACGTTGCCTAT

本发明中，所述捕获探针在合成时在5’端进行氨基修饰，并且连接 15-20个T或连接C12作为间隔链，然后将探针与所选的编码微球进行偶 联。

本发明的微球，一般选择荧光编码的微球，例如来源于Luminex或 其他代理公司的任何编号的微球，特异性探针与荧光编码微球偶联形成 检测微球，由此构成检测芯片。

本发明的链亲和素-藻红蛋白(Streptavidin-R-phycoerythrin，SA-PE) 为一种荧光蛋白，能被液相芯片检测系统中的绿色激光激发发光，由此 可以进行定性或定量检测。

本发明涉及上述基因液相芯片的制备方法，该方法包括：

1.选取编码微球，取适量例如约1.25×10⁶个于离心管内，离心弃上清 后，加入一定量，例如0.1mol/L的2-(n-吗啉代)乙磺酸溶液使之重悬；