[发明专利]获取与牡丹花型性状相关的分子标记的方法及其专用引物

说明书

技术领域

本发明涉及一种获取与牡丹花型性状相关的分子标记的方法及其专用引物。

背景技术

牡丹属于芍药属的木本类群，是中国特有的传统名花，素有“花王”之称。传统的杂交育种法周期长，无法早期筛选目标性状，严重限制了培育新品种的速度。分子标记技术能够将标记与植物性状相联系，为牡丹育种提供了一种新手段。利用DNA标记辅助选择育种将给传统的杂交育种带来革命性的变化。传统的育种选择是对表型性状的变异进行选择，但有些重要性状(如花色、花型等与观赏品质密切相关的性状)无法在早期检测出来，分子标记技术就可以利用种子以及幼苗进行DNA多态性检测，根据与目的基因相关的标记进行选择，能提高选择的准确度，缩短育种周期，提高育种效率和选择的可靠性，相当简便。

简单重复序列(simple sequence repeat，SSR)标记是目前最常用的微卫星标记之一。SSR标记具有重复性好、多态性高、呈共显性遗传、数量丰富和遍布整个基因组等优点，广泛应用于植物的遗传图谱构建、基因标定、标记辅助育种、品种鉴定、遗传多样性研究方面。为了有效利用牡丹的丰富资源，需要建立牡丹的SSR分子标记技术体系，并寻找牡丹的观赏性状与标记的关联。

发明内容

本发明涉及获取与牡丹花型性状相关的分子标记的方法及其专用引物。

本发明提供了获取与牡丹花型性状相关的分子标记的专用引物，包括如下引物对甲：序列表的序列1所示的DNA序列和序列表的序列3所示的DNA序列。

所述专用引物还可包括如下引物对乙和/或引物对丙和/或引物对丁：

引物对乙：序列表的序列2所示的DNA序列和序列表的序列3所示的DNA序列；

引物对丙：序列表的序列1所示的DNA序列和序列表的序列4所示的DNA序列。

引物对丁：序列表的序列2所示的DNA序列和序列表的序列4所示的DNA序列。

本发明提供的获取与牡丹花型性状相关的分子标记的方法，可包括如下步骤：

1)提取牡丹的基因组DNA；

2)以基因组DNA为模板，利用所述专用引物进行PCR扩增；

3)将PCR扩增产物进行变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，根据电泳带型确定与待测牡丹花型性状相关的分子标记。

步骤1)中，所述牡丹的基因组DNA可来自牡丹的任何器官，优选来自叶片，最优选来自幼嫩叶片。

步骤2)中，所述PCR扩增中，退火温度为53.5-57.4℃，循环数个数为32-36。

步骤3)中，电泳采用4-6.5％的变性聚丙烯酰胺凝胶。4-6.5％指的是凝胶浓度T(％)，即凝胶溶液中单体丙烯酰胺和交联剂N，N′-亚甲基双丙烯酰胺的总质量浓度。

应用所述方法得到的分子标记也属于本发明的保护范围。

本发明还保护一种获取与牡丹花型性状相关的分子标记的试剂盒，含有所述专用引物。

所述试剂盒还包括PCR反应的常规试剂、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的常规试剂和银染的常规试剂；所述试剂盒优选包括聚丙烯酰胺、DNA聚合酶和Mg²⁺离子。

所述专用引物或所述试剂盒在获取与牡丹花型性状相关的分子标记中的应用也属于本发明的保护范围。

应用本发明的专用引物对牡丹基因组进行PCR扩增，得到的电泳图带型清晰且具有多态性，在该位点得到11个等位基因。使用单因素方差分析和相关分析，与牡丹花型有关的B类基因的第7个等位基因(375bp处)和花型关联。单因素方差分析中P＝0.027(显著性水平小于0.05)。相关分析中的相关系数是0.296，P＝0.027(显著性水平小于0.05)。本发明提供的分子标记可以用于检测牡丹的花型性状，可以提高牡丹选择育种的准确性和效率，缩短育种周期，为牡丹针对花型的育种提供了一种有效的方法。

本发明通过一系列的优化步骤建立了牡丹的SSR分子标记技术体系，获得了一个花型性状和标记的关联，为牡丹花型的育种提供了一种有效的方法，并且为牡丹连锁遗传图谱构建、基因标定、品种鉴定、分子标记辅助育种奠定了技术基础。

附图说明