[发明专利]重组人干扰素a2b的基因优化及高效表达

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地涉及重组人干扰素α2b编码基因的优化、高效可溶性表达及高活性纯化。 

背景技术

重组人干扰素α2b具有广谱抗病毒、抗肿瘤、抑制细胞增殖以及提高免疫功能等作用，是治疗急慢性病毒性肝炎的首选治疗药物。 

但是，重组人干扰素α2b存在表达效率不高、且目的蛋白多为包涵体等工业化生产的制约因素。目前工业化生产重组人干扰素α2b的表达量约为20％～30％，表达形式为包涵体蛋白，必须经过变性剂溶解包涵体，然后除去变性剂使包涵体蛋白复性等工艺步骤，获得的蛋白活性低，比活仅为2.0×10⁸IU/mg。解决该问题的有效途径之一就是通过基因序列修饰以提高表达水平并增加蛋白的可溶性表达，提高纯化后蛋白的活性。 

发明内容

(一)要解决的技术问题 

本发明的目的是提供重组人干扰素α2b编码基因的优化序列，本发明的又一目的是提供一株高效可溶性表达重组人干扰素α2b的大肠埃希氏菌。 

(二)技术方案 

本发明提供了一株高效表达可溶性重组人干扰素α2b的大肠埃希氏菌(Escherichia coli)CGMCC No.2827。该菌株已于2008年12月25日被保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，保藏编号为CGMCC No.2827。 

本发明提供了两条重组人干扰素α2b编码基因的大肠杆菌密码子优化序列IFN-α2b及hIFN-α2b，其核酸序列分别如SEQ ID No：1及SEQ ID No：2所示。 

本发明公开了两条大肠杆菌密码子优化序列IFN-α2b及hIFN-α2b以及高效表达可溶性重组人干扰素α2b的大肠埃希氏菌(Escherichia coli)CGMCC No.2827在工业化生产重组人干扰素α2b中的应用。 

(三)有益效果 

本发明提供的高效表达可溶性重组人干扰素α2b的大肠埃希氏菌(Escherichia coli)CGMCC No.2827，其重组人干扰素α2b基因序列是经由大肠杆菌密码子优化的序列，目的蛋白的表达量占菌体总蛋白的50％以上，且90％以上以可溶性蛋白的形式存在。蛋白的纯化，经过常规离子交换、分子筛等纯化步骤，无需变性复性，获得的蛋白活性高，达到4.0×10⁸IU/mg。 

本发明所述的菌株于2008年12月25日被保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，保藏编号为CGMCC No.2827。 

附图说明

图1是重组人干扰素α2b编码基因的特异性扩增片段凝胶电泳图，泳道1为大肠杆菌密码子优化后的IFN-α2b基因扩增结果(520bp)，泳道2为大肠杆菌密码子优化后的hIFN-α2b基因扩增结果(520bp)，M为DNA分子量标记DL2000； 

图2是重组质粒NdeI与EcoRI双酶切鉴定图，泳道1为pET43.1a-IFNα2b(505bp+5612bp)，泳道2为pET43.1a-hIFNα2b(505bp+5612bp)，M为DNA分子量标记DL15000； 

图3是重组人干扰素α2b诱导表达后的SDS-PAGE检测图，泳道1表示重组质粒pET43.1a-IFNα2b在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中未进行诱导表达的结果，泳道2和3表示重组质粒pET43.1a-IFNα2b在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中的诱导表达结 果，泳道4和5表示重组质粒pET43.1a-hIFNα2b在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中的诱导表达结果，泳道6表示重组质粒pET43.1a-hIFNα2b在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中未进行诱导表达的结果，M1和M2为蛋白分子量标记； 

图4是重组人干扰素α2b蛋白的可溶性表达分析图，泳道1表示超声破碎后离心的沉淀物，泳道2表示超声破碎后离心的上清液，M为蛋白分子量标记； 

图5是重组人干扰素α2b蛋白纯度检测分析图，泳道1、2表示离子交换层析后层析主组分电泳纯度，泳道3、4表示分子筛层析纯化后主组分电泳纯度，M为蛋白分子量标记； 

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。 

实施例1重组人干扰素α2b编码基因的优化及克隆构建