[发明专利]抗MFAP3L单克隆抗体及其在肿瘤检测中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及免疫学和细胞学领域。具体而言，本发明提供了一种可以产生与人结直肠癌细胞的天然抗原结合的单克隆抗体的杂交瘤，由该杂交瘤产生的单克隆抗体可应用于人结直肠癌的诊断试剂或相关领域。 

背景技术

结直肠癌又称大肠癌，在我国常见恶性肿瘤中排第五位。在过去的25年中，随着人民生活水平的提高和饮食结构的改变，其发病率呈上升趋势，上升速度在各种恶性肿瘤中排第一位。肝脏是结直肠癌最易发生的转移器官，被称为结直肠癌器官转移的“第一站”，它是结直肠癌患者死亡的主要原因之一。在整个病程中，约有50％的结直肠癌发生肝转移(同时性转移为15％--25％，异时性转移为20％)，并最终死于以肝脏为主的远位转移。发生这种情况的原因是多方面的，比如手术的切除范围不足、常规病理取材时潜在阳性淋巴结的遗漏等都可造成对肿瘤分期的低估。但缺少较现行临床标准更精确而具指导意义的肿瘤分类标准是一个更为重要的原因，而这种情况又会直接影响到患者治疗方案的制定。只有通过早期发现甚至预测肝转移的发生，才有可能对肿瘤病期进行更准确的评估，尽早地进行针对性治疗，从而提高生存率，改善预后。 

目前临床上检测结直肠癌肝转移主要依靠影像学技术，包括：B超、CT、MRI和血管造影等，对肝脏转移灶的检出率为50％--90％。但检出时多因转移灶过大、数目过多、分布太广或与周围血管关系过于密切而失去有效治疗时机。而且对于直径＜1cm的微小转移灶，影像 学技术也很难做出明确诊断。随着免疫学和分子生物学的发展，一系列敏感性和特异性更强的检测手段，如免疫组织化学、酶联免疫吸附实验(ELISA)、实时定量PCR(real-time PCR)和流式细胞仪等也被用于在外周血、胆汁和淋巴结等样本中检测微量肿瘤细胞和肝脏微小转移灶的存在。上述技术的应用，既为结直肠癌肝转移的早期诊断提供了可能，也使预测肝转移的分子标志物成为研究热点。 

本发明人利用双向电泳和基质辅助激光解吸附飞行时间串联质谱(MALDI-TOF/TOF)等蛋白质组学技术，在几十例大肠癌原发灶组织样品中筛查与肝转移特异相关的蛋白。我们发现，微丝相关蛋白3样(Microfibrillar associated protein 3-like，MFAP3L)的基因在转移组样本中高表达。MFAP3L是2002年从人睾丸cDNA文库中克隆出的一个与精子发生相关的基因，其功能研究到目前为止尚不多见，而检测该蛋白的特异性抗体也从未被制备。该基因的mRNA全长1345bp，编码45kDa蛋白。Southern印迹结果显示该基因在除卵巢外的人类各种组织中都有表达，其中在睾丸中高表达，在结肠中低表达。对于这样的新的靶点蛋白，急需提供特异性的检测抗体。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题 

本发明的第一个目的是提供一种能专一性针对MFAP3L单克隆抗体杂交瘤及其制备方法。以及这种抗MFAP3L单克隆抗体杂交瘤分泌的抗体在肿瘤检测中的用途。 

本发明的第二个目的是提供一种特异性好的单克隆抗体，该抗体的亚类为IgG1，其能特异性地结合MFAP3L重组抗原和天然抗原。 

本发明的第三个目的是提供一种可以用于实验或临床诊断肿瘤组织MFAP3L表达水平的诊断试剂或检测试剂。 

本发明的第四个目的是提供抗MFAP3L单克隆抗体在检测肿瘤发生，发展及转移中的用途，特别是检测MFAP3L高表达的结直肠癌，更特别是发生远端脏器转移的肿瘤中的用途。 

解决技术问题所采用的技术手段 

本发明人通过原核表达该蛋白，免疫Balb/c小鼠并经过融合、克隆筛选、制备腹水、亲和层析技术纯化腹水获得了鼠源单克隆抗体。免疫印记试验显示该蛋白在高转移潜能的结肠癌细胞系RKO中的表达明显高于低转移细胞系HT29，而免疫组化(IHC)检测显示，在另外105对结直肠癌和正常组织样本中MFAP3L蛋白在肿瘤组织中的表达明显高于配对正常组织，而且高表达该蛋白的病例发生包括肝脏在内的各种远端脏器转移的几率较高，术后五年生存率较低(P＜0.001)。具体地，本发明涉及以下几个方面： 

1.一种单克隆抗体，其特征在于所述单克隆抗体由保藏日为2008年12月30日、保藏号为CGMCC 2840的小鼠杂交瘤细胞系70016-1产生。 

2.项目1所述的单克隆抗体，其特征在于所述单克隆抗体为小鼠IgG1亚型单克隆抗体。 

3.含有项目1的单克隆抗体的免疫组化检测试剂，其用于检测人结直肠癌组织和正常组织中微丝相关蛋白3样表达的差异。