[发明专利]包含类凝血酶的止血组合物及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种止血组合物及其制备方法，更具体是涉及一种包含类凝血酶的止血组合物及其制备方法。

背景技术

人和动物凝血过程包括纤维蛋白的形成与交联，这一过程包括纤维蛋白单体的形成、聚合及纤维蛋白的交联。

1)纤维蛋白单体的形成：纤维蛋白原是由肝合成，具有两条α链(Aa)、两条β链(Bβ)、和两条γ链(γ2)，即三对不同的多肽链组成的糖蛋白，可用(Aa、Bβ、γ)2表示，在凝血酶的作用下，纤维蛋白原释放出A和B小肽，形成纤维蛋白单体。

2)纤维蛋白单体的聚合及交联：可溶性纤维蛋白单体间通过氢键等次级键相连而成的多聚体凝块，虽可网罗血细胞而形成血凝块，但较松软且不稳定，需在Ca²⁺参与下，由XⅢa作用才能进一步转变为稳定的纤维蛋白多聚体。因子XⅢ是由两对不同的多肽链组成的四聚体，在Ca²⁺参与下由凝血酶、Xa作用于转变为XⅢa，XⅢa使可溶性纤维蛋白多聚体中一分子纤维蛋白单体的Gln残基与另一分子单体的Lys残基间形成分子间共价键，从而形成稳定的纤维蛋白多聚体，并在血小板的作用下，使网罗血细胞的血块进一步收缩，形成更坚固的血凝块，完成凝血过程。

在凝血过程中凝血酶起主要作用。在蛇毒中存在着一类蛋白酶，它们与凝血酶有相似的功能，被称为蛇毒类凝血酶。蛇毒类凝血酶主要存在于蝮亚科(Viperidae)和蝰科(Crotalidae)蛇毒中。蛇毒类凝血酶具有精氨酸酯酶活性，能够直接作用于纤维蛋白原，水解释放血纤肽A(fibrinopeptide A，FPA)或B(FPB)，使纤维蛋白单体首尾聚合而凝固。在体外作为促凝剂引起血浆或纤维蛋白原凝集，但类凝血酶在体内不激活凝血因子XⅢ，由类凝血酶水解生成的纤维蛋白凝块不产生侧链交联，对纤溶酶的作用高度敏感，很容易被天然网状内皮系统或正常的纤溶作用清除。一般来说，不同种属的血浆纤维蛋白原对类凝血酶的敏感性依次为人＞狗＞鼠＞兔。

蛇毒类凝血酶与凝血酶的不同点在于：1、已知的蛇毒类凝血酶均是单一的多肽链，具有多个二硫键，不含游离的巯基。凝血酶含A、B两条链。2、几乎所有的类凝血酶均为糖蛋白，但与凝血酶不同的是其寡糖链是与天冬酰氨连接，而不是丝氨酸。3、它进行水解时有的仅使纤维蛋白原Aa链上裂解出纤维蛋白肽A，有的蛇毒则只裂解出纤维蛋白肽B，或是裂解出纤维蛋白A和B肽，但速率不同。其分子间是首尾相连接。4、对凝血因子XⅢ无激活作用，不能使纤维蛋白之间交联。5、对纤维蛋白原的作用较凝血酶更专一，其活性不被抗凝血酶Ⅲ、肝素、水蛭素、大豆胰蛋白酶等抑制剂所抑制。6、类凝血酶对热稳定，即使在低浓度时对热也稳定。7、类凝血酶形成的凝块不会引起收缩。

纤维蛋白止血胶，它的作用机制是效仿血液凝固的最后阶段，使纤维蛋白原在凝血酶和钙离子的作用下，转变为纤维蛋白网，再在第XⅢ因子的作用下，变为稳定的纤维蛋白网，从而发挥其止血功效。1909年Bergel首次报道了纤维蛋白粉的止血功能。现今生产的生物胶都是由动物体内提取，含A、B两种试剂。试剂A包括生物胶主体及主体溶解液两部分，主要含高浓度的纤维蛋白原、凝血因子XⅢ；试剂B则包括催化剂及催化剂溶解液，主要含凝血酶原(或直接用凝血酶)和氯化钙。当B试剂的溶解液和催化Ca²⁺剂混合后，便将凝血酶原激活转化为凝血酶。凝血酶能水解纤维蛋白原，使之转化为纤维蛋白单体。单体由于负电荷减少，自发聚合成不稳定的可溶性纤维蛋白多聚体。同时，在Ca²⁺存在的条件下，凝血酶能激活因子XⅢ。因子XⅢ能催化某些肽链间的残基共价结合，最后形成稳定的不溶性纤维蛋白多聚体，起到止血、封闭、粘合作用。

目前，上市的品种主要有奥地利IMMUNO公司生产的TISSEEL纤维蛋白封闭剂。其产品含四个组分：1)冻干纤维蛋白原，75-115mg/ml，并含有XⅢ因子，纤维结合蛋白等；2)纤维蛋白原溶解液，含抑肽酶3000KIU/ml；3)冻干凝血酶，500IU/ml；4)凝血酶溶解液，含氯化钙40mmol。四个组分分别用西林瓶密封包装，并配有一种双联注射器。使用前，分别用两个注射器抽取两种溶解液，溶解相应冻干组分，再分别将两种溶解后溶液用两只注射器抽出，并将两只注射器通过一个三通组装成双联注射器；使用时，将两种溶液同时等量混合喷涂到创面上，起到止血封闭创面的作用。另一种市售的纤维蛋白封闭剂是由奥地利NYCOMED医药公司生产的商品名为“特可考”的纤维蛋白封闭剂，其有欧洲专利EP0059265。该纤维蛋白封闭剂的各组分粘附在胶原海绵上。使用时直接贴创面即可。