[发明专利]胶枝霉素C的制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体而言，涉及化合物胶枝霉素C (Gliocladicillin C)的制备方法，以及化合物胶枝霉素C在制备抗肿瘤活性 的药物中的应用。本发明还涉及用于发酵制备胶枝霉素C的粘帚霉属 (Gliocladium sp.)菌株6.102 CGMCC No.2673。

背景技术

恶性肿瘤是目前危害人类健康的主要疾病之一。在第18届国际抗癌联 盟大会上，世界卫生组织的一项研究报告表明，今后20年，新发肿瘤患 者人数将由目前每年1000万增加到1500万，每年因恶性肿瘤而死亡的人 数也将由600万增至1000万。据国家卫生部统计，20世纪90年代我国肿 瘤发病率已上升为127/10万。近年来我国每年新增肿瘤患者160万～170 万，总数估计在450万左右。在恶性肿瘤的三大疗法中，药物治疗占有重 要的地位。在合成的化学类抗肿瘤药物中绝大多数都是以天然抗肿瘤活性 成分为先导化合物的。[参见，《中国肿瘤》2007，16，705-708]

据报道，1984～1995年，天然产物占上市抗肿瘤药的60％以上；1983 年以前在美国上市以及1983～1994年全世界批准广泛使用的92种抗肿瘤 药中，约62种来源于天然产物；1995～1999年，3个天然产物的衍生物作 为新抗肿瘤药上市，由此可见，天然产物是结构新颖和作用独特的抗肿瘤 化合物的重要来源。[参见，《中国抗生素杂志》2004，29，636-640]

本发明涉及的胶枝霉素C(Gliocladicillin C)结构式如下式(I)所示：

该化合物是本发明人首次发现并且命名的新结构化合物，同时是首次 报道其抗肿瘤活性。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用微生物发酵制备胶枝霉素C的方法，以 及提供胶枝霉素C在制备抗肿瘤药物中的应用。

本发明人在微生物次生代谢产物活性化合物的高通量筛选基础上，发 现了生产菌株粘帚霉属菌株6.102(CGMCC No.2673，于2008年9月26 日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC，中国 北京朝阳区大屯路中科院微生物研究所，100101))的固体发酵提取物具有 抗肿瘤活性；通过活性跟踪指导下的进一步分离纯化，制备并鉴定了该活 性化合物胶枝霉素C。通过对化合物进行抗肿瘤活性评价，发现其具有显 著的抗肿瘤活性。

具体而言，本发明内容如下：

本发明提供一种利用粘帚霉属菌株6.102发酵制备式(I)所示的胶枝霉 素C的方法，

所述方法的特征在于包括下列步骤：

a)将粘帚霉属菌株6.102进行固体发酵；

b)在步骤a)的固体发酵以后，向培养产物中加入有机溶剂提取，得到 提取液，将所述提取液减压蒸馏，得到粗提物；

c)将所述粗提物进行减压硅胶柱层析和凝胶色谱分离而得到活性组 分溶液，将所述活性组分溶液用高效液相色谱分离得到式(I)的化合物。

其中胶枝霉素C的生产菌株是粘帚霉属菌株6.102，该菌株分离自采 集于西藏林芝地区的冬虫夏草样品，并于2008年9月26日保藏于中国微 生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)(中国北京朝阳区大屯 路中科院微生物研究所，100101)，保藏编号为2673。粘帚霉属菌株6.102 属于子囊菌门(Ascomycota)，肉座菌目(Hypocreales)，肉座菌科 (Hypoceraceae)，粘帚霉属(Gliocladium sp.)。

在如上所述的本发明方法中，本领域技术人员应当理解步骤b)中所用 的有机溶剂包括多种不溶于水的在室温下是液态的有机溶剂，诸如氯仿、 乙酸乙酯、苯、甲苯、二甲苯等，优选地，所述有机溶剂是乙酸乙酯。

在优选实施方案中，本发明的胶枝霉素C具有良好的在体外抑制肿瘤 细胞生长的活性。所述肿瘤细胞包括子宫颈癌HeLa细胞和肝癌HepG2细 胞，另外，对肺癌A549细胞也有一定的抑制活性。

本发明还提供了式(I)所示的化合物胶枝霉素C在制备抗肿瘤活性的药 物中的用途。