[发明专利]Y染色体MiniSTR分型试剂盒及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种PCR扩增试剂盒，尤其涉及一种单管同时检测12个Y染色体MiniSTR基因座的荧光复合扩增试剂盒，本发明还涉及该荧光复合扩增试剂盒的制备方法以及该试剂盒在司法鉴定中的应用，属于分型和鉴定领域。

背景技术

短串联重复序列(short tandem repeat，STR)是人类基因组中由2～6个碱基作为核心单位串联重复形成的一类具有长度多态性的DNA序列，其核心单位的数目变化和重复次数不同构成了STR的遗传多态性。STR分布广、数目多，约占人类基因组的10％，所包含的遗传信息是以往任何多态性标记所无法比拟的，因此STR是目前法医学个人识别和亲子鉴定最广泛应用的遗传标记。

作为一种成熟的检验技术，法医实际检案中大多数应用商品化的多色荧光标记STR复合扩增试剂盒，如ProfilerPlus、Cofiler、Identifiler、PowerPlex16等，可以得出微量DNA样品的基因分型。但是，在一些重特大刑事案件、突发性事件和群体灾难事故中，法医检案工作经常面临DNA高度降解的检材或低拷贝模板DNA，由于有PCR抑制剂的存在和DNA模板已经降解为很小的片断，使用上述的商品化试剂盒进行检测，经常会出现“优势扩增”或者“无效扩增”，以致于DNA降解检材成为现阶段法医DNA分型的难点，制约了某些重要物证在案件侦破中的作用。MiniSTR技术作为STR检验的一个新的发展方向，通过将STR遗传标记引物设计得尽可能接近重复区域而缩短PCR扩增产物片段长度，提高了DNA降解检材分型的成功率，同时与STR数据库具有良好的兼容性，很有潜力成为今后法医DNA检验中的一项常规分析技术。

Y染色体为男性所特有的染色体，在减数分裂的过程中除拟常染色体区(pseudoautosomal region)外，其他部分不与X染色体发生重组交换，其序列结构特征能够稳定地由父亲传递给儿子，呈父系遗传。随着男性暴力性犯罪率的提高，Y染色体STR(Y-STR)以其特有的单倍型父系遗传特点，在个体识别、亲权鉴定、混合斑男性成分检验和父系家族系谱的构建等方面发挥了重要作用，已成为法医学检验的主要遗传标记之一，开发具有高鉴定能力的Y染色体STR复合扩增试剂盒是国内外相关实验室的研究重点。

目前进口的Y-STR商品化试剂盒名称及包含的基因座如下：

(1)Y-PLEX^TM 12kit：DYS19，DYS389I，DYS389II，DYS390，DYS391，DYS392，DYS393，DYS385a/b，DYS437，DYS438，DYS439；

(2)Amp FLSTR Y-filer kit：DYS19，DYS389I，DYS389II，DYS390，DYS391，DYS392，DYS393，DYS385，DYS437，DYS438，DYS439，DYS448，DYS456，DYS458，DYS635，GATA-HA)。

其在国内法医学应用实践中还存在以下问题：①与商品化的常染色体STR试剂盒相比，Y-STR遗传分布具有更显著的地域、种族、民族差异性，进口试剂盒基于国外白种人群开发，大部分基因座在中国人群的基因频率分布较差、个人识别能力较低，如DYS389I，DYS391，DYS393，DYS437，DYS438等，在一定程度上难以满足法医DNA检验的工作需求；②试剂价格昂贵，既消耗了国家大量办案经费，也局限了DNA技术的国内应用范围.因此，建立以中国人群遗传资料为背景的Y染色体STR复合扩增试剂盒尤为重要.