[发明专利]人肝素酶cDNA表达载体在制备抗人肝素酶免疫抗体中的应用

权利要求书

1、人肝素酶cDNA表达载体在制备抗人肝素酶免疫抗体中的应用。

2、根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述人肝素酶cDNA表达载体，是 含有人肝素酶肝素酶全长编码cDNA的重组表达载体。

3、根据权利要求2所述的应用，其特征在于：以pcDNA3.1为出发载体，构建的 含有所述人肝素酶cDNA的重组表达载体为pcDNA3.1-HPSE。

4、制备抗人肝素酶免疫抗体的方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)用人肝素酶cDNA表达载体作为免疫原免疫动物；

2)从免疫动物的腹水液或血清中分离并纯化出抗人肝素酶免疫抗体。

5、根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤1)中用于制备抗人肝素酶免 疫抗体的免疫动物为小鼠、大鼠、兔、山羊、绵羊、猪、驴或马。

6、根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤1)中的免疫方案为：用质粒 浓度为200—300ug/mL的150ul人肝素酶cDNA表达质粒溶液注射小鼠臀部肌肉，然 后将电极针插入小鼠注射部位肌肉，给予6次单脉冲电刺激，14天后进行二次相同剂 量的免疫，共免疫6次。

7、根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述抗人肝素酶免疫抗体可用于 人肝素酶水平的免疫检测中，其中，用ELISA法检测细胞中的人肝素酶分子水平，包 括如下步骤：

1)用抗人肝素酶免疫抗体包被酶联板，洗板；

2)封闭经包被的酶联板，洗板；

3)加待测样品，洗板；

4)加酶标二抗，洗板；

5)加底物显色；

6)终止反应；

7)测定OD₄₅₀值。

8、一种检测人肝素酶分子水平的试剂盒，可包括权利要求4所述的抗人肝素酶 免疫抗体。

9、根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括与抗人肝素 酶免疫抗体发生相互作用的第二抗体，所述第二抗体为羊抗鼠IgG或兔抗鼠IgG。

10、根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中还包括显色液A 液和显色液B液，洗涤液，封闭液，抗体稀释液，所述显色液A液为过氧化氢或过氧 化脲溶液，所述显色液B液为邻苯二胺或四甲基联苯胺溶液。