[发明专利]A型产气荚膜梭菌杨树皮类脂灭活疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种疫苗，特别是涉及一种A型产气荚膜梭菌灭活疫苗。本发明还涉及该疫苗的制备方法。

背景技术

产气荚膜梭状芽抱杆菌(Clostridiump peffringens)又称魏氏梭菌(Clostridium welchii)，由英国人Welchii和Nuttad首先从一个腐败的人尸体产生气泡的血管中分离得到，并以Welchii的姓命名为魏氏梭菌。该菌在各种普通培养基中均能迅速生长，最突出的生化特性是对石蕊牛乳培养基的“暴裂发酵”，可用于快速诊断。该菌在体内能形成明显的荚膜，无鞭毛，不能运动。在自然界常以芽孢形式存在，但芽孢形成较困难。芽孢的抵抗力非常强，10％福尔马林10分钟才能将其致死。该菌广泛分布于自然界，遍布世界各地，同时也是肠道中的常在菌群之一，在一定条件下，可引起各种严重疾病。该菌能产生多种强烈的外毒素，目前发现的有12种(α、β、γ、η、δ、ε、ι、θ、κ、λ、μ和v)，其中，α、β、ε和ι是主要的致死毒素。依据主要致死性毒素与其抗毒素的中和试验，可将此菌分为A、B、C、D、E五个型。

A型产气荚膜梭菌主要引起胃肠道的病变，是人畜气性坏疽病、兔梭菌性下痢、马坏死性肠炎及人食物中毒的主要致病菌，也是引起鹿出血性肠炎的主要致病菌。该型菌产生的多种外毒素中，最主要的是α毒素。A型产气荚膜梭菌的变异菌株能产生既无磷脂酶活性也无溶血活性的相应α毒素，能显著诱导抗体的产生。在生产上可作为高效疫苗菌株加以利用。

为了控制产气荚膜梭菌病的流行，许多学者曾在细胞水平上研制过产气荚膜梭菌的单联和多联灭活菌苗用于预防。陈锡全等进行了“兔病毒性出血症”和A型产气荚膜梭菌联苗的研究；姚湘燕等采用三个不同地方的牛源产气荚膜梭菌研制过牛产气荚膜梭菌浓缩氢氧化铝灭活苗，证实该苗安全性好，免疫后30天以2个致死量强毒攻击，可获100％保护，免疫后200天以同样剂量攻击仍可获90％保护；阎喜军、赵传芳等对吉林省的鹿出血性肠炎流行情况进行了调查，之后研制了鹿魏氏梭菌单价灭活苗，疫苗使用安全，免疫效果可靠；谭诗文等曾经进行了羔羊痢疾、大肠杆菌病、羊猝疽、羊肠毒血症四联油佐剂灭活苗的研制；屠伟英等研制了仔猪产气荚膜梭菌肠毒血症疫苗；徐为中等研制了兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病、A型产气荚膜梭菌病三联浓缩灭活苗，对产气荚膜梭菌的保护率达到80％以上；宁玉容等研制了羊四种梭菌病(羊快疫、肠毒血症、猝狙、羔羊痢疾)疫苗，该苗的免疫期限为一年，肠毒血症暂定为半年；文希喆等还研制了产气荚膜梭菌多联干粉灭活苗。

已研制出的疫苗在使用中尚存在一些需要进一步解决的问题：1、家畜接种反应较重；2、注射剂量大，使用多有不便；3、免疫持续期较短。因此，需要尝试筛选和使用其它佐剂，以制备出A型产气荚膜梭菌新的佐剂疫苗，来提高疫苗免疫原性和机体免疫应答水平。

佐剂的种类很多，按其作用机理分为吸附佐剂、颗粒佐剂、免疫调节因子等；也可按其来源分为植物来源、微生物及生物来源、人工合成有机物和无机盐等。有些是由不同来源的物质配制而成的。

免疫佐剂是先于抗原或抗体同时应用，能非特异性地改变或增强机体对抗原的特异性免疫应答，发挥其辅助作用的物质。免疫佐剂能明显增强多糖或多肽等抗原性微弱的物质诱导机体产生特异性免疫应答；用最少量的抗原和最少的接种次数刺激机体产生足够的免疫应答和高滴度的抗体，在血管或粘膜表面能维持较长时间，发挥持久效果。

杨树皮类脂是从毛白杨树皮中提取的一种橙黄色脂溶性纯天然萃取物，具有高度的生物学活性，含有大量的多糖类、有机酸、甾醇、甙类、黄酮类物质，这些物质在动物体内协调统一，可以大大提高动物体的免疫机能。