[发明专利]一种高纯度紫杉醇及其衍生物的提取方法

说明书

技术领域

本发明属于天然化学物质提取技术领域，具体涉及紫杉醇及其衍生物的提取方法，特别是从曼地亚红豆杉枝叶中提取高纯度紫杉醇及其衍生物的方法。

背景技术

紫杉醇、紫杉醇注射液已收载于现行美国药典和中国国家药品标准中，用于治疗转移性卵巢癌和乳腺癌、肺癌、食管癌。紫杉醇，英文名称Paclitaxel，分子式C₄₇H₅₁NO₁₄，分子量853.92，白色结晶性粉末，无臭、无味，美国药典和中国国家药品标准规定其纯度要求是，按干燥品计算，含C₄₇H₅₁NO₁₄应为98.0％～102.0％。

紫杉醇是继阿霉素后最热点的抗癌新药之一。目前，生产紫杉醇的原料主要来源于红豆杉树皮，由于树皮为不可再生资源，供应有限，而叶片中紫杉醇含量又很低，导致提取紫杉醇的原料十分匮乏。

紫杉醇的提取非常困难，特别是工业化提取更难，例如，200610047378.2公开的“一种高效分离纯化紫杉醇的方法”中，仅获得了1％紫杉醇含量的提取物，出膏率约为1.36％。造成紫杉醇提取困难的主要原因为：1)紫杉醇在植物中的含量极低，目前，紫杉醇含量最高的曼地亚红豆杉中也只达到0.017～0.046％。2)紫杉醇作为一种生物大分子物质，受温度、有机溶剂、酸、碱等环境条件的影响，易降解或异构生成其他紫杉烷类物质，如紫杉醇在强酸性或弱碱性条件下会降解为巴卡亭III或发生表位异构生成7-表紫杉醇；温度较高时也会发生降解反应，生成相应的小分子物质。3)紫杉醇除了以游离态存在于植物体外，还常常以结合态存在，即形成紫杉醇键合物如7-木糖紫杉醇、7-木糖基-10-去乙酰紫杉醇等。由于糖基是水溶性的，导致这些紫杉醇键合物也具有水溶性，不溶于脂，而紫杉醇在水中的溶解度很低，属于脂溶性物质，所以结合态的紫杉醇在提取过程中一般会有损失。

分布于北美加拿大的曼地亚红豆杉是东北红豆杉T.cuspidata和欧洲红豆杉T.baccata的天然杂交种，不仅在树皮中含有紫杉醇，且4～5年生植物的叶子中的紫杉醇含量与生长70～80年的天然红豆杉树皮中的紫杉醇含量相当。曼地亚红豆杉为灌木植物，枝叶萌发力强，生物量大，已在我国引种成功，是用红豆杉属植物提取紫杉醇的最佳替代原料。

存在于红豆杉枝叶中的紫杉烷萜类化合物不仅自身具有抗癌活性，还可以作为合成紫杉醇或其类似物的前体，例如10-去乙酰基巴卡亭III本身不具有抑制肿瘤的作用，但利用它可以合成比紫杉醇具有更高抗癌活性的多西紫杉醇，因此，提取紫杉醇衍生物同样具有重要意义。

然而，从曼地亚红豆杉枝叶中提取分离紫杉醇也有着特有的困难：枝叶中的色素、蜡质、鞣质酸等含量比树皮中要高，杂质处理更加困难；人们推测紫杉醇键合物可能是紫杉醇在植物体内运输的一种特殊形式，一般认为紫杉醇的合成部位是嫩芽、枝叶或根、茎等，而储存部位是树皮，所以以一般的方法从曼地亚红豆杉整株中提取紫杉醇将会损失更多的结合态紫杉醇。

因此，目前从曼地亚红豆杉枝叶中提取紫杉醇及其衍生物的主要方法存在着提取效率低、成分损失大、成本过高、工业化水平低等缺点，特别是紫杉醇提取物干膏中的紫杉醇含量很低，紫杉醇衍生物含量更低，杂质高，为后续纯化分离成药品紫杉醇、纯紫杉醇衍生物造成了很大的困难。

发明内容

本发明的目的是提供一种高纯度紫杉醇及其衍生物的提取方法，该方法从曼地亚红豆杉枝叶中提取紫杉醇及其衍生物，提取过程中紫杉醇及其衍生物损失少，提取物干膏中紫杉醇及其衍生物含量高、杂质少。

本发明一种高纯度紫杉醇及其衍生物的提取方法包括以下步骤：

1)将曼地亚红豆杉枝叶干燥至水分10％以下，粉碎成80～120目的曼地亚红豆杉枝叶粉末；

2)向曼地亚红豆杉枝叶粉末中加入占其重量10倍体积的甲醇，室温下浸提12小时以上，再于35～45℃浸提3～4小时，冷却，过滤，得滤渣1，滤液减压回收甲醇，得浓缩液1；

3)取滤渣1，加入体积为红豆杉枝叶粉末重量8倍的甲醇，于35～45℃浸提3～4小时，放置12小时以上，过滤，得滤渣2，滤液减压回收甲醇，得浓缩液2；

4)取滤渣2，以体积为曼地亚红豆杉枝叶粉末重量8倍的甲醇渗漉提取，渗漉液减压回收甲醇，得浓缩液3；

5)将浓缩液1、浓缩液2、浓缩液3合并，得紫杉醇及其衍生物提取液，加入与提取液等体积的石油醚脱脂，再加入与提取液等体积的正己烷脱脂，得紫杉醇及其衍生物稠膏。