[发明专利]一种降解木质纤维素类生物质产氢细菌的筛选方法

权利要求书

1.一种降解木质纤维素类生物质产氢细菌的筛选方法，其特征在于降解木质纤维素类生物质产氢细菌的筛选方法按以下步骤实现：a、取10g牛粪堆肥样品放入三角瓶中，加入生理盐水和数颗玻璃珠，在摇床上振荡30min，然后取1mL上清液接种于CM3纤维素滤纸培养基中静置培养一周，得菌体富集液；b、取1mL菌体富集液用厌氧的无菌水进行倍比稀释，再接种于CM3纤维素粉末固体培养基中，制成滚管，分离培养5～7天，然后挑取水解透明圈菌落转接于CM3纤维素滤纸培养基中纯化培养3～4天，得纯菌株；c、纯菌株接种于CM3纤维素粉末固体培养基中，制成滚管，分离培养5～7天，然后挑取水解透明圈菌落转接于CM3纤维素滤纸培养基中纯化培养3～4天，再转接于CM3纤维二糖固体培养基中培养至得到单一菌落；d、将单一菌落接种于CM3纤维素粉末液体培养基中，在37℃、130r/min的条件下振荡培养一周后检测气相，有氢气产生的即为降解木质纤维素类生物质产氢细菌；其中步骤a中生理盐水为充入无菌氮气的生理盐水；步骤a中CM3纤维素滤纸培养基是在改良CM3培养基中加入滤纸条；步骤b中CM3纤维素粉固体培养基是在改良CM3琼脂培养基中加入纤维素粉；步骤c中CM3纤维二糖固体培养基是在改良CM3琼脂培养基中加入纤维二糖；步骤d中CM3纤维素粉液体培养基是在改良CM3培养基中加入pH-101纤维素粉；步骤a中的改良CM3培养基每1000mL由1.5g的KH₂PO₄、4.2g的Na₂HPO₄·12H₂O、0.5g的NH₄Cl、0.18g的MgCl₂·6H₂O、2.0g的酵母浸粉、0.5g的还原剂L-半胱氨酸、2.00mL质量浓度为0.1％的氧化还原电位指示剂、10mL的微量元素液和余量的水组成，pH值为6.8～7.2；所述的微量元素液每1000mL由0.01g的维生素B₁₂、0.025g的抗坏血酸、0.025g的核黄素、0.02g的柠檬酸、0.05g的吡多辛、0.01g的叶酸、0.01g的对氨基苯甲酸、0.025g的肌酸、0.01g的MnSO₄·7H₂O、0.05g的ZnSO₄·7H₂O、0.01g的H₃BO₃、0.01g的N(CH₂COOH)₃、0.01g的CaCl₂·2H₂O、0.01g的Na₂MoO₄、0.2g的CoCl₂·6H₂O、0.01g的AlK(SO₄)₂和余量的水组成；步骤a中滤纸条为经过处理的滤纸裁剪而成，即采用质量浓度为1％的醋酸浸泡滤纸条24h，然后用碘液检查确定无淀粉后，再用质量浓度为2％的苏打水冲洗滤纸条至中性，晾干后裁剪。

2.根据权利要求1所述的一种降解木质纤维素类生物质产氢细菌的筛选方法，其特征在于步骤b中的改良CM3琼脂培养基是在改良CM3培养基中加入琼脂。