[发明专利]人源基因工程抗体TRD109及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是人源基因工程抗体TRD109及其制备方 法与应用。

背景技术

变应性鼻炎(allergic rhinitis，AR)是由变应原激发的、由IgE介导的 鼻部炎性疾病，是耳鼻喉科最常见的一种疾病，也是全球最常见的慢性疾病之 一，其主要症状有流涕、鼻塞、鼻痒和喷嚏等。随着人类现代生活方式和生 态环境的急剧变化，AR的发病率在全球呈增长趋势，且城市的发病率远高于 农村，AR虽非重大疾病，但对人们的工作、学习和生活产生了严重的影响， 已逐渐成为全球性的健康问题。AR治疗原则主要为避免接触变应原、药物控 制和免疫调节，目前还没有特效的治疗措施，常规的治疗只是缓解症状、减 轻炎症，所以研制一种特异的AR治疗制剂已经成为耳鼻喉科的研究热点。

研究表明，TNF-α在变应性鼻炎的发生、发展过程中起着至关重要的作 用。AR患者血清中TNF-α水平明显升高，而TNF-α基因缺陷(TNF-α(-/-)) 的小鼠致敏后其鼻粘膜中嗜酸细胞的数量及嗜酸细胞活化趋化因子的mRNA的 表达均较含有TNF-α基因的小鼠(TNF-α+/+(OVA))明显减少；在TNF-α+/+ (OVA)小鼠中存在的卵清蛋白特异性IgE的应答和IL-10mRNA的表达在TNF- α-/-(OVA)小鼠中完全被消除；而且TNF-α-/-(OVA)小鼠打喷嚏、鼻痒 等鼻部症状也明显改善。Jei He等人将含有可溶性的TNF-α受体和IgGFc片 段(sTNF-α-IgGFc)的嵌合基因的质粒转移进入上皮细胞中后发现有大量的 sTNF-α-IgGFc融合蛋白表达，该蛋白可以在L929细胞上对抗TNF-α的溶细 胞作用，将含质粒pGEG.sTNF-α-IgGFc的溶液滴入AR小鼠的鼻粘膜中后发 现其鼻部的症状明显改善，嗜酸细胞、肥大细胞、IL-5(+)细胞的数量也较 对照组明显减少。综上所述，TNF-α可能是AR的理想治疗靶标，TNF-α的拮 抗剂可能是治疗AR的特效生物制剂。

TNF-α是一种促炎症反应细胞因子，在炎症反应和免疫反应的发生和发 展中起着关键的作用。变应性鼻炎(allergic rhinitis，AR)是由变应原激发 的、由IgE介导的鼻部炎性疾病。研究表明，TNF-α在变应性鼻炎的发生、 发展过程中起着至关重要的作用，AR患者血清中TNF-α水平明显升高，而减 少TNF-α的产生可以抑制变应性鼻炎的发生和发展，因此TNF-α的拮抗剂可 能是治疗AR的特效生物制剂。

TNF-α抗体已经应用于临床治疗多种疾病并取得了良好的治疗效果。临 床研究表明TNF-α抗体Infliximab(人鼠嵌合型TNF-α抗体)在治疗类风湿关 节炎中有明显的疗效，美国、欧洲和以色列共55个医疗中心参加的试验表明 了应用Infliximab(英利昔单抗)治疗克罗恩病长期效果明显，Abbott公司 利用噬菌体展示技术开发了一种人源性的TNF-α抗体，现称为Adalimumab， 试验结果表明Adalimumab对类风湿性关节炎的疗效确切，且毒副作用较少， 免疫原性较低。2002年12月，FDA批准Adalimumab用于治疗中度和重度的 活动性类风湿性关节炎。因此，使用抗TNF-α抗体来治疗TNF-α过度表达引 起的疾病是一个较好的治疗方法。去年姚俊等人研究发现抗TNF-α单克隆抗 体能拮抗TNF-α的炎症介导作用，对豚鼠分泌性中耳炎治疗有效，这又为使用 TNF-α抗体治疗变态反应性疾病提供了一个有力的证据。

如今TNF-α抗体已经被应用于临床治疗类风湿性关节炎、克罗恩病等， 且取得了良好的疗效，由于TNF-α在临床上的重要性日益突出，制备一种能 应用于临床诊断和治疗且较为经济的TNF-α抗体的要求也越来越迫切。现如 今临床上应用的TNF-α抗体主要有三种，分别是鼠源性TNF-α抗体、人鼠嵌 合型TNF-α抗体和人源性TNF-α抗体。前两种由于其免疫原性过高而存在较 明显的副作用，Abbott公司应用噬菌体展示技术开发的一种人源性的TNF-α 抗体Adalimumab，虽其临床效果已得到广泛的认可，且毒副作用较少、免疫 原性较低，但其高昂的治疗费用给大多数患者带来了沉重的经济负担。