[发明专利]一种植物叶片特异性启动子及其应用

权利要求书

1.一种植物叶片特异性的启动子，其核酸序列如序列表1所示。

2.根据权利要求1所述的启动子，其特征在于，所设计的大豆叶片特异性表达基因GmSecA 的启动子的PCR扩增引物如下，其中上游引物中引入KpnI酶切位点，下游引物中引入Nco I酶切 位点：

上游引物：5’-GGTACCGGAAACGGTGGGGGTTTCGGGAAG-3’

下游引物：5’-CCATGGTTCGAATGAATTAAGAATTGCGGA-3’。

3.根据权利要求1所述的启动子，其特征在于，从大豆基因组D NA中克隆获得叶片特异性表达基因GmSecA的启动子，具体操作步骤如下：

(1)以大豆基因组DNA为模板，用PCR方法扩增GmSecA基因的启动子；

(2)采用大连宝生物(TaKaRa)公司的DNA琼脂糖凝胶回收试剂盒，回收PCR扩增产物；

(3)将回收的上述扩增产物和pGEM-T-Easy载体，购自Promega公司，按载体说明书中的比 例混合，在连接酶催化下进行连接反应；

(4)将连接产物，转化大肠杆菌DH5α感受态细胞；

(5)通过抗性筛选，获得该启动子的阳性克隆。

4.一种权利要求1所述的植物叶片特异性启动子的应用，其特征在于，利用该启动子构建 获得“启动子-任意目的基因”融合基因，转化任何植物而获得叶片特异性过表达该目的基因的转基 因植物。

5.根据权利要求4所述植物叶片特异性启动子的应用，其特征在于，该启动子在大豆中驱 动GmSecA基因在叶片中特异表达；利用该启动子构建获得“GmSecA启动子-GUS”融合基因，在 转基因拟南芥中，该启动子能够驱动GUS报告基因在叶片中特异表达。