[发明专利]一种枯草芽孢杆菌活菌制剂的保护剂

说明书

技术领域

本发明涉及生物制品领域，具体的说是提供一种枯草芽孢杆菌活菌制剂的保护剂。

背景技术

枯草芽孢杆菌是专性需氧菌，夺氧能力很强，但在厌氧状态下却不能生长。在禽类肠道中，虽然可以查到枯草芽孢杆菌，但为数很少，即或有些增殖，也会很快代谢。因此研制开发枯草芽孢杆菌制品，通过外源方式补充枯草芽孢杆菌在体内肠道定植的数量，对于调整肠道微生态平衡，提高免疫力，促进健康，具有重要意义。

近年来，国内外枯草芽孢杆菌制品行业发展迅猛，成为全球发展最快的行业之一，占有越来越重要的地位，产品种类繁多。然而，目前上市的许多枯草芽孢杆菌制品普遍存在活菌含量低、活菌保藏期短等质量问题。尤其是液态制品。采用冷冻保藏的方法，虽然可以显著延长液态活菌保藏期，但维持冷冻费用较高，运输不方便，对冷冻保藏中心的依赖性过强。枯草芽孢杆菌活菌液体制剂采用枯草芽孢杆菌优良菌种经液体发酵培养，浓缩分离，与保护剂介质混溶。液体制剂不仅活菌含量高、保藏期长，而且保藏和运输方便，机械化程度高，便于工业化批量生产；既可直接口服，又可作为饲料添加剂，具有广阔的推广前景。

因此研究枯草芽孢杆菌活菌制剂的保护剂很有意义，在最大限度保持枯草芽孢杆菌的存活率，使枯草芽孢杆菌活菌制剂易于长期保存并且活力不降低，更加适用于工业化生产的需求。

发明内容

本发明的目的是提供一种枯草芽孢杆菌活菌制剂的保护剂。

本发明所提供的用于枯草芽孢杆菌活菌制剂的专用保护剂，由下述组分(W/V)组成：乳糖3-4.5％、羧甲基纤维素钠0.5-1％、山梨酸钾0.5-1％、维生素E 0.1-0.5％、维生素C 0.1-0.5％、水质柠檬0.1-0.2％。

上述枯草芽孢杆菌活菌制剂的保护剂，优选含量(W/V)乳糖4.5％、羧甲基纤维素钠0.5％、山梨酸钾0.5％、维生素E 0.1％、维生素C 0.1％、水质柠檬0.1％。

上述枯草芽孢杆菌活菌制剂的保护剂，其特征在于每1ml保护剂中含有1.0×10⁹-1.0×10¹⁴cfu。

本发明的有益效果为：含有本发明保护剂的枯草芽孢杆菌活菌制剂在常温下保存12个月活菌数仍保持在较高的水平，并且在温度较高(37℃)的环境下，可以保持6个月有效。而且本发明操作简便，适合大批量制备枯草芽孢杆菌活菌制剂，解决了用常规方法生产的枯草芽孢杆菌制品常温保存困难的问题，具有很高的应用价值。

具体实施方式

下述实施例中的方法，如无特别说明，均为常规方法。

实施例1：枯草芽孢杆菌活菌制剂的制备

枯草芽孢杆菌菌种活化将菌种接种于牛肉膏蛋白胨固体培养基上。然后放进温箱中培养，在37℃，培养16h；

枯草芽孢杆菌的发酵培养将上述已活化培养的菌落洗脱，以无菌操作法加入到牛肉膏蛋白胨液体培养基中，37℃，200转/min，培养16h。

枯草芽孢杆菌活菌制剂的制备将上述发酵的发酵液通过管道导入离心机，在低温(4℃)的条件下，用大容量离心机离心，6000rpm，离心15min。收集离心筒中泥状菌体，40℃减压干燥，得枯草芽孢杆菌干菌粉10g，检验活菌数，为2.2×10¹⁶cfu/g。

保护剂配制：称取乳糖45g，羧甲基纤维素钠5.0g，山梨酸钾5.0g，维生素E1.0g，维生素C1.0g，水质柠檬1.0g，取适量牛肉膏蛋白胨液体培养基溶解后，混合均匀，定容至1000ml。

添加保护剂取上述保护剂溶液500ml，加入上述枯草芽孢杆菌干菌粉4.55g，搅拌均匀，并用保护剂溶液定容至1000ml。

实施例2：枯草芽孢杆菌活菌制剂的稳定性检测

将按照实施例1的方法制备的枯草芽孢杆菌活菌制剂分成2份，放置于室温及37℃留样箱，室温放置的样品每3个月取样检测一次活菌数和活菌指数，37℃放置的样品每个月取样检测一次活菌数。

活菌数检测方法：

1.充分振摇液体样品，吸取0.5ml液体样品于试管中，加入4.5ml稀释液，充分振摇，既成1∶10供试液；

2.稀释：吸取0.5ml供试液，加入4.5ml稀释液到另一试管中，充分混匀，使成1∶100的供试液，重复上述操作，进行10倍系列稀释，直至所需的稀释度；

3.滴样：吸取所需测定的稀释度(一般是倒数3个稀释度)的菌液0.2ml滴于无菌平皿，倒入无菌温浴的牛肉膏蛋白胨培养基，混匀后静置凝固，共做6个平皿，每个稀释度重复2次；

4.培养：待平皿凝固后倒放于培养箱中，37℃培养16小时；