[发明专利]耐盐玉米种质资源的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术和现代农业技术领域，涉及一种耐盐植物种质资源的制备方法。

背景技术

盐碱土在世界上分布很广，面积也很大，约占陆地总面积的25％。目前世界上15％的种植土壤含盐碱量过高，即使采用灌溉技术，引灌不含盐碱的水，土地盐碱化的趋势依然十分严重，因为水中所含的盐分年复一年地积聚在土壤里，导致每年有上千万公顷的土地荒芜。中国约有2.0×107公顷盐碱荒地和6.7×10⁶公顷盐碱化土壤，约占全国土的面积的1/4；此外，在一些灌溉地区，由于耕垦发展与灌溉不配套，用水管水不善，地下水位迅速提高，还造成大面积的次生盐碱化土壤。我国盐碱地分布范围很广，并在呈扩大趋势，仅在山东省的黄河三角洲地带，每年新增加的盐碱地达6000多公顷。盐碱地的存在对作物的生长发育威胁很大，在农业生产中往往造成严重的损失，轻则减产20％-30％，重则可达70％-80％，甚至颗粒无收。据统计，我国有1.7亿人口受到土地过度盐碱化和荒漠化的威胁，由此造成的直接经济损失约20-30亿美元(中国二十一世纪议程编制领导小组，1994)。

改良和利用如此大面积的盐碱土壤，单纯依靠和强调土壤的改良措施，而忽视生物学措施的研究是不当的，国内外的实践证明，选用和培育抗盐品种、提高植物的抗盐性是改良和利用盐碱土壤的一条经济有效途径。

玉米作为全球主要的粮食作物、饲料作物和重要的工业原料，分布范围较广，从北纬58度通过热带到达南纬35-40度。玉米播种面积仅次于小麦、水稻而居第三位，世界玉米年产量是6亿吨以上，超过小麦1亿吨，在可预见的将来，玉米产量将进一步增加。我国是世界上玉米生产和消费的第二大国，仅次于美国，常年播种面积在2500万公顷左右，产量在1.20亿吨左右，分别占粮食播种面积的22％和产量的25％。

盐胁迫是影响全世界作物产量的主要非生物胁迫之一。玉米是对盐胁迫敏感的作物，通过转基因的方法培育耐盐耐旱玉米杂交种是有效利用盐碱地的一种途径，对于世界及我国农业生产有重要意义。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术中的不足，提供一种耐盐玉米种质资源的制备方法。

本发明的技术方案概述如下：

一种耐盐玉米种质资源的制备方法，包括如下步骤：

(1)提取纯化盐生碱蓬总DNA，并准备受体玉米自交系种子；

(2)将玉米自交系种子经灭菌处理后培养，萌发，待70％-90％的所述种子萌动露白后，在无菌环境下剔除非正常的种子，置于容器中，加入浓度为400μg/ml-600μg/ml的盐生碱蓬总DNA提取液，使盐生碱蓬总DNA提取液的液面高于所述种子1-2厘米，加入细胞渗透剂乙酰丁香酮，使所述乙酰丁香酮的最终浓度为50-150μmol/L或加入细胞渗透剂二甲基亚矾，使所述二甲基亚矾的最终浓度为100-300m mol/L，将所述容器在60-100rpm振荡，25-30℃培养1-3天；

(3)将所述步骤(2)培养发芽的种子播于含有质量百分含量为1％的NaCl的无菌的沙土中筛选培养6-8天，取生长健壮、根系生长良好的幼苗移入大田，按田间正常管理，开花时套袋自交，收获籽粒。

所述盐生碱蓬总DNA提取液的浓度优选为500μg/ml。

所述乙酰丁香酮的最终浓度优选为100μmol/L。

所述二甲基亚矾的最终浓度优选为200mmol/L。

本发明的优点：

利用本发明的方法获得的耐盐玉米种质资源与未转化的玉米自交系相比，耐盐性有明显的提高，在1％NaCl环境下，发芽速度提早一天，7天发芽率提高15个百分点。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1

一种耐盐玉米种质资源的制备方法，包括如下步骤：

(1).提取纯化盐生碱蓬总DNA，并准备受体玉米自交系种子；

1)供试材料的准备

外源DNA供体盐生植物-碱蓬采至于天津塘沽滨海盐碱地，受体玉米自交系为天津科润津丰种业有限责任公司自选的高产、抗病自交系P2345。

2)盐生碱蓬总DNA的提取纯化

采用改进的CTAB法(王彦芹等，塔里木大学学报，2007年，第02期)提取盐生植物碱蓬叶片总DNA，提取的粗DNA提取液经纯化后，符合导入要求，DNA浓度为500μg/ml，经紫外线光谱测定A260/230≥2.0，A260/280≥1.8；