[发明专利]蛋白质荧光检测卡及检测方法

说明书

技术领域

本发明属于蛋白质检测技术领域，涉及一种对医药卫生、疾病监测、畜禽检疫、食品卫生安全、环境监测及其它工、农业质量检测方法的改进。

背景技术

蛋白质测定是临床常规检查项目，对疾病的初步诊断具有一定的临床参考意义。蛋白质分析可分为湿式和干式化学系统两大类。湿式系统实际上是机械化了的试管法，采用光电比色分析，属于自动生化分析仪。自动生化分析仪具有检测速度快、准确和检测项目多的特点。适用于大、中型医院使用。干式系统即卡式蛋白质测定仪，它具有自动识别、扫描、数据分析及报告等功能，有较高检验灵敏度、特异性、准确性，测定时间为3-15分钟。检测卡均为一次性胶体金或荧光标记，目前只有德国、美国、日本等少数发达国家拥有此项技术和产品，由于检测卡的成本较高，国内目前仅有大、中型医院使用卡式蛋白质测定仪。

发明内容

本发明的目的是：提供一种蛋白质荧光检测卡及检测方法，它利用“抗体-抗原-抗体-荧光”双夹心的免疫层析原理，制备一种蛋白质检测卡，建立一种对生物样品中蛋白质(抗原/抗体)含量进行简单、快速定量测定的检测方法。可广泛应用于医药卫生、疾病监测、畜禽检疫、食品卫生安全、环境监测等领域。

本发明的技术方案是：每个检测卡均由特异的内膜组成聚酯薄膜硝化纤维免疫层析带，层析带内置1-5个检测项目和内部质控反应区，检测反应及内部质控反应均在该层析带上进行。通过与质控反应区荧光强度对比，计算各检测反应区的变异，从而提供可靠的检测结果。

测定分析时，操作者将标本加到检测卡样品孔中，而后将检测卡插入蛋白质荧光检测仪中，标本由于毛细作用沿着膜渗透，标本中的待测定成分与标记抗体结合而形成抗原抗体复合物。此复合物和标记抗体随后在检测区和质控区被固定。当反应完成后，蛋白质荧光检测仪分析检测区和质控区荧光的变化，进而定量测定出待测成分的浓度。

本发明的有益效果是：结合现代光学与生物学技术原理，研发的荧光检测方法，具有高灵敏度、灵活性强、干扰性低及经济实用等特点，可广泛应用于医药卫生、疾病监测、畜禽检疫、食品卫生安全、环境监测及其它工、农业质量检测领域。省去了标本的复杂预处理过程，在采样现场即刻进行分析，快速得到检验结果。

附图说明

图1-13是实施例1中检测卡结构及检测图；

图1是检测卡主视图；

图2是检测卡后视图；

图3是检测卡侧剖视图；

图4是检测卡内膜组成图；

图5是空白内膜组成图；

图6为HbsAg和HBsAb阳性结果；

图7为HBsAg阳性结果，HbsAb阴性结果；

图8为HbsAb阳性结果，HbsAg阴性结果；

图9为HbsAg和HBsAb阴性结果；

图10-13若反应后，在质量控制区没有荧光线出现，说明检测卡整体反应系统工作不正常。

图14-32是实施例2中检测卡结构及检测图；

图14是检测卡主视图；

图15是检测卡后视图；

图16是检测卡内膜组成图；

图17是空白内膜组成图；

图18为阳性结果；

图19-21Myo、cTnI和CK-MB某一种蛋白质单独阳性的结果；

图22-24Myo、cTnI和CK-MB某两种蛋白质阳性的结果

图25为阴性结果；

图26-32若反应后，在质量控制无荧光线(19)出现，说明检测卡整体反应系统工作不正常。

图33蛋白质荧光检测仪结构图。

具体实施方式

如图33所示，4是检测卡的反面；3是检测孔；31是激发光源；32是柱面镜；33是发射光滤光片；34是聚焦镜组；35是接收光滤光片；36是准直镜组；37是光电接收器；38是数据采集与处理电路；39是控制电路。

检测卡进入检测仪进行检测时，检测器前端与透明胶片(21)紧密接触，与几乎没有空间。通过卡的移动，测定硝酸纤维膜上的荧光分布强度。

实施例1

以人乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和表面抗体(HBsAb)检测为例

1.材料与方法

1.1抗原、抗体及实验材料的来源

人乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和表面抗体(HBsAb)及其单克隆及多克隆抗体均为自制；荧光粉、羊抗鼠IgG多抗购买于华美公司。检测卡外壳自制；玻璃纤维素膜和硝酸纤维素膜购于Whatman公司。

1.2荧光标记抗体的制备方法