[发明专利]一种含林蛙抗菌肽的抗菌洗剂及其制备方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种从两栖动物林蛙中得到的抗菌肽制成的产品，尤其涉及一种含林蛙抗菌肽的抗菌洗剂及其制备方法，属于洗涤用品制备技术领域。

背景技术；

目前市场上销售的抗菌洗剂产品，多为化学合成制品，因其含有化学成分，对人体易造成不同程度的刺激伤害等毒副作用。如醋酸氯已定，苯甲溴铵为主成分的抗菌洗剂，其抑菌效果在10分钟以上可达90％，无明显杀菌效果，而且具有极强的刺激性酸味，对皮肤粘膜一有刺激性。相比之下，市售的中药洗剂，100％  为混悬液，液体浑浊，瓶底明显有沉淀物；刺激味亦很明显。且以上几类产品的适用范围，适用于女性阴部卫生清洁，而适合用在全身各部位又能达到满意效果的产品目前还为之甚少。

从最初人们研究北美天蚕的免疫机制时发现了其血淋巴产生具有抑菌作用的多肽物质以来，相继从其他昆虫以及两栖类动物、哺乳动物中，也分离到结构相似的抗菌多肽。迄今为止，在不同动物组织中已发现了很多具有抗菌作用的蛋白质和多肽，已有70多种抗菌多肽的结构被测定，抗菌肽的概念得到了极大的扩展。然而，作为一种多肽类物质，其生物活性也易随时间的延长而丧失，因此，如何在较长时间使其维持在较高的活性水平是近年来研究多肽类物质的热点。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种含林蛙抗菌肽的抗菌洗剂，具有杀菌、抗病毒、止痒、止血收敛、清热等功能，解决了现有抗菌剂刺激性强，杀菌效果不明显的问题。

本发明还一种含抗菌肽抗菌洗剂的制备方法，适用工业化生产。

本发明提供的含林蛙抗菌肽的抗菌洗剂，是由以下原料按重量份数比制成的：

林蛙抗菌肽0.0005-0.05wt％  甘露醇5-20wt％

磷酸盐缓冲液(0.25M pH5-7)75-95wt％、余量为水。

本发明林蛙抗菌洗剂的制备方法，包括如下步骤得到的：

(1)将林蛙干蛙皮，用4％的醋酸溶液以料液比为1∶10-15(m/v)的比例浸泡24h(室温)。

(2)将所得浸提液8000r.p.m离心15min，弃沉淀，留上清。

(3)将上清液煮沸5min，冷却，8000r.p.m离心15min，取上清过30KDa膜。

(4)将过30KDa膜溶液冻干，将冻干粉溶于0.25M pH 5-7的75-95wt％磷酸盐缓冲液中，加入5-20wt％多肽保护剂甘露醇制成淡黄色或棕黄色透明液体即得抗菌洗剂。

以下实验表明本发明的含林蛙抗菌肽的抗菌洗剂的抑菌活性：

(1)细菌培养使用LB肉汤(Luria broth)培养基。

(2)在无菌96孔板中每孔加入100μl液体，其中50μl为对数生长期的菌稀释至106 CFU ml-1，另外50μl为抗菌洗剂水溶液的系列2倍稀释液。

(3)37℃培养18-20h后，用酶标仪(Elx 800 universal microplate reader)读630nm的吸光度值。

(4)同一菌株的OD₆₃₀^PB/OD₆₃₀^B(PB：抗菌洗剂+菌液；B：菌液)表征抗菌洗剂对细菌增殖活性的影响。

表1本发明的抗菌洗剂的抑菌活性

表2与其它消毒产品的比较