[发明专利]蜡样芽孢杆菌及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种蜡样芽孢杆菌，同时还涉及一种该蜡样芽孢杆菌的制备 方法，及其在防治小麦纹枯病方面的应用。

背景技术

由禾谷丝核菌(Rhizoctonia cerealis)侵染小麦引起的小麦纹枯病(wheat sharp eyespot)是一种重要的土传病害，在我国广泛分布于黄淮冬麦区、西北春 麦区和长江中下游麦区，严重危害到小麦的生产，一般田块可减产10％～30 ％，重病田块减产50％以上，个别田块甚至绝收。

目前，对于小麦纹枯病，尚缺乏有效抗病品种，病害的防治主要通过化 学防治的方法，生产中主要采用立克秀、适乐时、三唑类等化学杀菌剂。由 于农药的大量使用，不仅导致小麦种植成本的提高，还对环境造成危害，甚 至导致抗药性菌株的出现，致使化学农药的防效降低或者丧失。生物防治作 为一种有广泛前途的植物病害的防治方法，目前已经成为国内外研究和应用 的热点，但是，由于传统生物防治是通过根际微生物及其代谢产物对病原物 的竞争、拮抗以及诱导植物产生抗病作用(Induced systemic resistance，ISR) 来实现的，容易受环境条件的影响，在实际应用过程中出现防效不稳定的现 象。

植物内生细菌是指能定殖在健康植物组织内，并与植物建立了和谐关系 的一类细菌。利用定殖于小麦内部的内生细菌来进行生物防治，可以克服上 述传统生物防治的不足，具有重要的理论意义和广泛的应用前景。因此有必 要加强筛选对病害有较高防治效果的小麦内生细菌，从而加以应用。目前关 于用内生芽孢杆菌来防治小麦纹枯病的研究中，没有任何关于用蜡样芽孢杆 菌的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种从拔节期健康小麦植株中分离筛选得到一 株具有防治小麦纹枯病的内生细菌——蜡样芽孢杆菌。

同时，本发明的目的还在于提供一种该蜡样芽孢杆菌的制备方法。

更进一步地，本发明的目的在于提供了一种蜡样芽孢杆菌的应用。

为了实现上述目的，本发明的技术方案采用了一种蜡样芽孢杆菌，Bacillus cereus O-9，其保藏号为CCTCC NO：M209041。

同时，本发明的技术方案采用了一种蜡样芽孢杆菌的制备方法，选取健 康小麦，取新鲜小麦根，自来水冲洗表面，滤纸吸去水分，经消毒、无菌水 冲洗2-4次后剪小段于无菌研钵中，加入无菌磷酸缓冲液(pH 7.0)，充分研 碎；静止10-20min取上清进行稀释，取稀释液经培养基在28-30℃培养1 -2d；菌落长出后再纯化于4-6℃保存。

所述的消毒是先用75％乙醇表面消毒25-35s，再用0.1％升汞消毒10 -15min。

所述的培养基的具体成分为：蛋白胨20g，甘油10.0g，K₂HPO₄1.5g， MgSO₄·7H₂O 1.5g，琼脂15g，蒸馏水1000mL，pH 7.2。

胰蛋白胨(tryptone)5g、酵母提取物(yeast extract)2.5g、NaCl 5g，琼脂 粉15g溶解于800ml去离子水中，调pH至7.5。

进一步地，本发明的技术方案采用了一种蜡样芽孢杆菌在预防小麦纹枯 病方面的应用及蜡样芽孢杆菌在治疗小麦纹枯病方面的应用。

本发明的用于防治小麦纹枯病的菌株为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)O-9，该菌株是从黄淮麦区，拔节期小麦植株中分离得到的，短杆状， 个体较小，两端钝圆，革兰氏阴性，接触酶实验阴性，不产生芽孢，在LB平 板上菌落不透明、光滑、湿润、白色、全缘，该菌具有运动性，产生几丁质 酶、铁载体等可能的生防相关因子。

本发明按照常规方法进行对小麦纹枯病的生物防治：将蜡样芽孢杆菌 (Bacillus cereus)O-9在KMB培养基中扩大培养后，制备成一定浓度的菌悬液， 以此菌悬液处理小麦种子，将处理后的种子播种于感染了纹枯病菌的土壤， 再以蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)O-9发酵液做一次浇灌；20天后，统计小 麦纹枯病发病情况，计算防效。

本发明所涉及的蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)O-9在防治小麦纹枯病方 面的效果明显优于其他芽孢杆菌。

以下为本发明的菌株与现有的菌株在防治小麦纹枯病方面的对比