[发明专利]特异性清除血液中病毒粒子的亲和吸附柱及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种血液净化的亲和吸附柱，尤其涉及一种特异性清除血液中病毒粒子的亲和吸附柱及其制备方法，能够辅助或替代传统的治疗方法，成为一种新型的治疗病毒性疾病的方法。

背景技术

病毒性疾病是常见的感染疾病，如乙型肝炎就是目前困扰人们的一种常见的病毒感染性疾病。病毒性肝炎是由多种肝炎病毒所致的一种以肝脏损伤为主的全身性急性或持续性传染病。我国是乙型肝炎的高发区，人群总感染率高达60％，构成乙型肝炎传染源的表面抗原携带者约为10％。全国乙型肝炎表面抗原携带者至少有1.2亿，其中约10％最终转化为各种慢性肝炎，包括慢性肝炎肝硬化和肝癌。现在我国慢性肝炎病人约为1200万，每年肝病死亡人数约为30万，其中16万人死于肝癌。全世界1亿丙型肝炎病毒感染携带者，我国就占3000万到4000万，加上其它型肝炎，可见病毒性肝炎给社会带来了巨大经济负担以及对人类健康带来的巨大影响。

目前治疗病毒性肝病的方法有抗病毒药物和干扰素，但成本高、疗程长、副作用大。

研究发现乙肝患者的血液中含有大量的乙型肝炎表面抗原的DANE氏颗粒(HBsAg)，形成病毒血症，为了治疗这种病毒血症，我们发现可以通过血液透析的方法把血液从人体动脉引出，将血浆中的乙型肝炎表面抗原与偶联在载体上的抗乙型肝炎表面蛋白抗体特异性结合，来清除血浆中的乙型肝炎表面抗原，达到辅助清除病毒或治疗的目的。

本课题组研究发现，同样的方法也可适用于其它病毒血症，如丙肝病毒血症，人免疫缺陷病毒如艾滋病毒血症等。

此外，实验发现干扰素的疗效与治疗开始前血液病毒载量有关，病毒载量与疗效负相关。因此，在抗病毒药物应用之前快速降低血清病毒载量，可提高干扰素的效果，从而缓解或治愈患有病毒血症的病人。

清除了病毒表面抗原及其包裹的病毒的血浆重新输入人体内，这种方法在人体外对血液进行处理，没有化学物质的刺激，毒副作用小，且无需输入新鲜血浆或置换液，具有广阔的临床意义和市场前景。

发明内容

本发明的目的就在于克服现有技术存在的缺点和不足，而提供一种特异性清除血液中病毒粒子的亲和吸附柱及其制备方法。本发明毒副性小，特异性强，能够大量清除血液中的病毒，可辅助或替代传统的治疗方法。

本发明的目的是这样实现的：

一、特异性清除血液中病毒粒子的亲和吸附柱(简称亲和吸附柱)

亲和吸附柱包括吸附载体、活化剂和抗病毒表面蛋白抗体；

在吸附载体上加入活化剂得活化载体，在活化载体中加入抗病毒表面蛋白抗体进行抗体偶联得免疫吸附剂，免疫吸附剂装入吸附柱即得亲和吸附柱。

1、吸附载体

吸附载体是一种临床常用的血液净化材料，包括树脂、玻璃纤维、淀粉微球、大孔共聚物、活性炭等。

2、活化剂

活化剂为1，4-二羟基正丁烷双缩水甘油醚(1，4-Butanediol DiglycidylEther，简称BDDE)。

BDDE的结构和作用机制：

BDDE是一个长链分子，双环氧基中的一个与载体上的羟基反应，另一个环氧基与载体之间存在一个“长臂”，正是这个“长臂”结构极大地影响了免疫吸附剂对抗体的吸附性能，即利用相同结构的长臂之间的斥力，使活性基团呈“放射状”处于载体表面，在一定程度上减少了抗体分子中大量氨基所可能导致的“多点结合”，保持偶联抗体的正常结构，保持其活性。

BDDE在载体表面引入活泼的环氧基，可与抗体中的氨基反应，通过共价键将抗体偶联在载体表面，得到免疫吸附剂。

3、抗病毒表面蛋白抗体

抗病毒表面蛋白抗体是一种与病毒表面蛋白特异性结合的蛋白质；其作用原理是通过抗体与抗原的特异性结合将病毒粒从血浆中清除。

其来源是：

通过单克隆抗体技术制备抗病毒表面蛋白抗体(Ab)。

亲和吸附柱的工作原理：

亲和吸附作为一种生物分离技术，可用于血液净化和治疗免疫性疾病。亲和吸附柱是利用抗原和抗体之间特异性结合的性质，将抗病毒表面蛋白抗体偶联在吸附载体上形成亲和吸附柱。将血液从动脉输出，经过孔径适宜的分离膜将血细胞、蛋白和血浆分离，病毒粒子主要留在血浆中。将血浆通过亲和吸附柱，血浆中的病毒表面蛋白和抗病毒表面蛋白抗体结合，从而将病毒粒子从血浆中清除，将清除过病毒粒的血浆回输到人体内。吸附有病毒粒的亲和吸附柱可以通过洗脱的办法，将病毒粒从亲和吸附柱上洗脱下来，亲和吸附柱就可重复使用。

二、亲和吸附柱的制备方法

亲和吸附柱的制备方法包括下列步骤：

①活化载体