[发明专利]一种表达人工修饰合成的甲型H1N1流感病毒HA-NA-M1基因的重组杆状病毒

说明书

技术领域

本发明涉及病毒学领域。更具体地，本发明涉及一种新的含有人工修饰合成的甲型H1N1流感病毒主 要免疫原性基因HA-NA-M1和标记基因eGFP的重组杆状病毒株，这种重组毒株标记基因eGFP和甲型H1N1 流感病毒HA-NA-M1蛋白，并包装成流感样病毒颗粒。该病毒颗粒研制的疫苗可以预防人和猪甲型H1N1流 感病毒的感染。

背景技术

甲型H1N1流感(Influenza virus H1N1)是引起人和猪的呼吸道疾病的重要原发病原之一，常常与 其他病原混合感染造成更严重的损失。该病毒属于正粘病毒科流感病毒属，根据病毒核蛋白抗原性不同， 分为甲、乙和丙三个型(国际称其为A、B和C三个型)。甲型流感病毒(influenza virus，IV)为有囊 膜的RNA病毒，其囊膜主要由血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)以及基质蛋白(M1)构成。

甲型流感病毒危害巨大，不但影响畜牧业(尤其养禽业)健康发展，更重要的是可以引起人类的流感 大暴发，产生重要的公共卫生危害。人类历史上发生过3次流感大暴发，即1918年由H1N1亚型流感病毒 引起的西班牙流感、1957年由H2N2亚型流感病毒引起的香港流感和1968年由H3N2亚型流感病毒引起的 亚洲流感。其病原均由当时存在于禽类的甲型流感病毒直接突变或和人的流感病毒在猪体内重组而来，如 1918年西班牙流感病毒H1N1的HA和NA基因分别具有猪流感病毒和禽流感病毒的分子特征。2009年4月 出现甲型H1N1流感病毒是一种新型变异流感病毒。这种新的甲型流感病毒HA、NP和NS基因来源于与1918 年人流感病毒密切相关的经典猪流感病毒；NA和M来自于1979年引入的欧洲猪流感病毒；PB1来自人的 H3N2；PB2和PA来源于禽流感，该流感在1998年前后引入到猪体(Chang LY，et al.Novel Swine-origin Influenza Virus A(H1N1)：The First Pandemic ofthe 21^st Century.J Formos Med Assoc，2009；108(7)：526-623)。

目前甲型H1N1流感几乎从美洲蔓延至世界各地，传播途径既可以动物传人，也可以人传人。截至2009 年7月6日，目前全球已有94512人感染，429人死亡 (http://www.who.int/csr/don/2009_07_06/en/index.html)；高效疫苗和抗病毒药物预防控制甲型H1N1 流感病毒有效措施。现阶段治疗甲型H1N1流感病毒最有效途径是抗病毒药物治疗，目前使用较多的是 oseltamivir(又称Tamiflu)和zanamivir，但是目前在丹麦、日本、美国、中国香港等国家和地区发现抗Tamiflu 耐药毒株(http://www.who.int/csr/disease/swineflu/notes/h1n1_antiviral_resistance_20090708/en/index.html)， 从而增加了该疾病带来的危险，该领域迫切需要有效的疫苗来预防控制该甲型H1N1流感病毒。迄今为止， 还没有商品化的疫苗问世，而传统的季节性流感疫苗不能有效预防该新型流感病毒。据WHO报道常规灭活 疫苗目前正在加紧研制，还没有问世(http://www.who.int/csr/disease/swineflu/notes/h1n1_vaccine_20090713/en/index.html)，新型疫苗还未见报道。因此，本领域迫切需要开发出具有高效、安 全的针对甲型H1N1流感的基因工程疫苗。

发明内容

本发明的一个目的就是提供编码甲型H1N1人工修饰合成的免疫原性基因cDNA序列。

本发明的另一个目的是提供一种转移载体pFBDPHmHNM1P10eGFP，该载体含有编码具有甲型H1N1 流感病毒免疫原性基因HA-NA-M1的cDNA序列和标记基因eGFP。