[发明专利]鸡快慢羽分子鉴定方法

说明书

技术领域

本发明属于动物育种技术领域，具体涉及一种鸡的快慢羽分子鉴定方法。

背景技术

雌雄鉴别是现代养鸡生产中的重要技术，在商品蛋鸡生产中，雏鸡出壳时即通过雌雄鉴别淘汰公雏以节省饲养公雏的空间和饲养成本，提高母鸡的成活率；在肉鸡生产中，通过雌雄鉴别进行公母分养，便于根据公母不同的生长发育速度、营养需求给予不同的饲料和饲养管理条件；对于种鸡，可通过雌雄鉴别仅给下游祖代、父母代鸡场提供单性别的种雏鸡保护育种成果。目前常用的雌雄鉴别方法包括翻肛鉴定和自别雌雄两类；翻肛鉴定利用公、母雏退化交尾器的差别，通过目测进行鉴别(一般需对雌雄鉴别员进行特殊培训)；而自别雌雄则利用位于鸡性染色体(Z染色体)上基因的伴性交叉遗传现象，根据雏鸡出壳时的表型差异鉴定出壳雏鸡的性别。当前最广泛用于自别雌雄的基因位点包括金银羽(S-s)位点及快慢羽(K-k)位点，但金银羽位点仅在洛岛红背景的鸡群中可以使用，而快慢羽位点则不受鸡品种遗传背景限制。快慢羽位点位于Z染色体上，其中慢羽(K)对快羽(k)为显性，利用快羽公鸡(Z^kZ^k)与慢羽母鸡(Z^KW)交配，后代公雏全为慢羽(Z^KZ^k)，母雏全为快羽(Z^kW)。快慢羽表型在雏鸡出壳24小时以内按如下方式鉴定：快羽型：主翼羽长于覆主翼羽2mm以上(相对长度)；其余为慢羽型。利用快慢羽进行鸡自别雌雄不受鸡品种遗传背景限制；相对于翻肛性别鉴定方法，其鉴别速度快，准确率高，不需要对鉴别人员进行技术培训，对雏鸡损伤小，交叉感染疾病的可能性小，因而在鸡雌雄鉴别中被广泛使用。

虽然快慢羽自别雌雄在鉴定方法上比翻肛雌雄鉴别技术容易的多，但利用表型鉴定鸡的快慢羽在应用于雏鸡自别雌雄时除鉴别准确率因鉴别误差有时不能达到100％外，最主要的问题是能进行准确鉴定的时间有一定的限制，一般不能超过出壳后24小时。因此在快慢羽自别雌雄配套系建系时需从雏鸡开始，需要2-3个世代才能形成后代达到一定自别雌雄准确率(一般要求99％以上)的配套系。这就造成快慢羽配套系培育过程复杂(涉及到谱系孵化、羽型鉴定及测交等繁琐过程)，周期较长，建系投入较大，使这项技术推广应用受到限制，因此很多企业目前仍采用翻肛雌雄鉴别。

早期研究证明ev-21(Endogenous Virus-21，内生病毒-21)与初生雏鸡的羽毛生长速度有关系，并认为ev-21的插入造成雏鸡羽毛着生速度缓慢，是快慢羽的控制基因。Tixier-Boichard等(1994)利用PCR技术通过检测是否有ev-21插入来鉴定快慢羽表型，发现有少量快羽个体有ev-21的插入，另外也有少数慢羽个体没有ev-21插入，(Tixier-Boichard MH，Benkel BF，Chambers JR，Gavora JS：Screening chickens for endogenous virus ev21 viral element by the polymerase chain reaction.Poult Sci 1994，73(10)：1612-1616.)，表明ev-21位点并不是鸡快慢羽表型的控制位点，而只是一个与快慢羽位点紧密连锁的位点。Elferink等(2008)发现了快羽等位基因与慢羽等位基因之间的差异(Partial duplication of the PRLR and SPEF2 genes at the late feathering locus inchicken.BMC Genomics.2008；9：391)，揭示了K位点的特点(见图1)，给我们利用分子标记方法准确鉴定快慢羽表型提供了可能性。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种鸡快慢羽的分子鉴定方法。本方法可不受时间限制，准确鉴定鸡快慢羽表型，从而缩短快慢羽自别雌雄配套系建系时间、减少投入。

实现本发明的技术方案如下：

1)利用在鸡Z染色体上找到K基因位点附近相关序列(Z染色体9960Kbp-10140Kbp之间的核苷酸序列)，根据快慢羽等位基因的结构设计两对引物对。

其中：

快慢羽都能扩增出来的质控内标引物的核苷酸序列如下：

CONTROL(对照)正向引物：5’GTGTTGTCCCAGCACTCCTT 3’，

CONTROL(对照)反向引物：5’GTTGAATCTTAGTCAGCAGCGT 3’；